PCR

¿Por qué es importante el Mg en la premezcla de PCR?

• Actúa como cofactor de la polimerasa

• Permite a correcta unión de los primers al templete de DNA

• No es importante

• Favorece la desnaturalización del DNA

La temperatura de anillamiento tiene como objetivo:

• Promover la desnaturalización del DNA

• Generar las condiciones optimas para la polimerización de la hebra naciente

• Favorecer la unión de los primers al DNA

• Ninguna de las anteriores

En una electroforesis en gel de agarosa el DNA migra hacia el polo negativo

• Verdadero

• Falso

El SYBR Green se une a la hendidura menor del DNA y emite florescencia para la cuantificación durante una qPCR

• Verdadero

• Falso

En una PCR anidada:

• Se utilizan más de un par de primers en simutáneo

• Primero se amplifica un fragmento de DNA y luego otro fragmento al interior del primero

• Se hacen variaciones en la temperatura de anillamiento durante el protocolo

• Se puede cuantificar el DNA a medida que se amplifica

Cual de los siguientes reactivos se añaden a una premezcla de PCR

• Taq Polimrasa

• Buffer TAE x1

• Bufer KCl

• dNTPs

• Sybr safe

A la hora de diseñar unos primers, se debe evitar:

• Que su contenido GC sean entre el 40% y el 60%

• Que su longitud sea entre 18 y 30 nucleótidos

• Que formen estructuras secundarias

• Que sus Tm sean similares

Una Hot-Start polimerasa:

• Es una polimerasa de alta fidelidad

• Es una polimerasa de E. coli y no de T. aquaticus

• Es una retrotranscriptasa

• Es una polimerasa bloqueada que se activa con calor

Las sondas TaqMan tinen acoplada una molécula Q que promueve la fluorescencia de una fluoróforo cuando están cerca

• Verdadero

• Falso

Una muliplex PCR permite amplificar más de un marcador en una sola reacción

• Verdadero

• Falso