Unidad 7 BMV

La PCR alelo específica puede ser optimizada agregando mismatches extra cuando...

• No se observa producto de amplificación en ningún caso

• Aparecen múltiples bandas de amplificación

• Los primers diseñados no discriminan correctamente cada alelo

• no es posible la amplificación del fragmento del tamaño esperado

Los primers "control" en una ASPCR sirven para

• corroborar la buena calidad del ADN molde

• optimizar la Tm de los primers alelo- específicos

• cuantificar el ADN molde

• amplificar el alelo wt

En la técnica CAPS se aprovecha el sitio de restricción naturalmente presente en...

• el alelo wt

• el alelo mutante

• ambos alelos

• en sólo uno de los dos alelos a diferenciar, cualquiera sea.

La variante dCAPS se basa en la digestión diferencial efectuada por una enzima de restricción específica mediante...

• una qPCR previa

• la introducción de al menos un mismatch en un primer para generar el sitio de restricción deseado

• la introducción de al menos un mismatch en ambos primers para generar el sitio de restricción deseado

• la introducción de un sitio de restricción completo en el extremo 5' de uno de los primers

La técnica HRMA necesita un equipo de Real Time PCR con un software específico para realizar el análisis de...

• La Tm de cada par de primers

• Las curvas de fusión con alta resolución que permiten distinguir entre los alelos amplificados

• la qPCR tradicional

• la cantidad de citosinas metiladas

La variante de HRMA para estudiar el grado de metilación de regiones específicas del genoma requiere del tratamiento previo con bisulfito. El mismo produce...

• La hipermetilación de las citosinas

• El cambio de las citosinas metiladas a uracilos

• El cambio de las citosinas no metiladas a uracilos

• El reemplazo de todas las citosinas por uracilos

La principal ventaja de la técnica de HRMA por sobre las demás radica en...

• la necesidad de contar con un equipo de qPCR

• la ausencia de digestión enzimática

• poder prescindir del chequeo posterior en geles de agarosa

• la menor sensibilidad de esta técnica

Las 3 técnicas hoy desarrolladas y sus variantes, en el contexto de los trabajos analizados fueron utilizadas para...

• la caracterización de regiones de heterocromatina

• La identificación de nuevos alelos mutantes

• La cuantificación de la expresión de los alelos en diferentes tejidos

• La detección de los alelos buscados (genotipado dirigido)