Muerte celular

Respecto de la apoptosis, ¿cuál de las siguientes es INCORRECTA?

• Es un proceso regulado, que consume ATP.

• Puede ser desencadenada por dos vías: intrínseca y extrínseca.

• Afecta a células individuales.

• Ocurre una fragmentación de ADN ordenada (internucleosomal).

• Provoca inflamación, por liberación del contenido celular al exterior.

Answer explanation

En apoptosis no existe liberación del contenido intracelular porque la célula degenera en cuerpos apoptóticos, que contienen todo el material celular.

Respecto de la necrosis, ¿cuál de las siguientes es INCORRECTA?

• No requiere energía en forma de ATP.

• Afecta grupos de células.

• La célula se lisa, derramando su contenido en el exterior.

• Los fragmentos celulares son fagocitados por macrófagos, lo que evita la inflamación.

• Entre los factores causantes podemos citar traumas e interrupción de la irrigación sanguínea.

Answer explanation

En necrosis, ocurre ruptura de la membrana plasmática con liberación del contenido interno, lo que desencadena una respuesta inflamatoria.

Respecto de la vía intrínseca de la apoptosis, ¿cuál de las siguientes es INCORRECTA?

• Involucra la activación de caspasas iniciadoras y ejecutoras.

• Se desencadena por factores como daño al ADN, hipoxia, radiación UV o ionizante.

• Involucra la formación de poros en la membrana mitocondrial externa.

• Las proteínas anti-apoptóticas Bax y Bak impiden la degradación del ADN.

• La vía extrínseca puede activar a Bid (generando tBid = bid truncado), el cual puede desencadenar la vía intrínseca.

Answer explanation

Bax y Bak son proteínas PRO-apoptóticas. Su función consiste en abrir poros en la membrana mitocondrial externa, en respuesta a una señal apoptótica.

Respecto de la vía extrínseca de la apoptosis, ¿cuál de las siguientes es INCORRECTA?

• Puede ser desencadenada por unión de ligandos de muerte a receptores de muerte, ubicados en la membrana plasmática.

• Puede provocar activación de la vía intrínseca.

• Requiere del consumo de ATP.

• Puede ser desencadenada por una enzima denominada granzima, que activa caspasas por clivaje.

• En las etapas finales, el ADN es fragmentado al azar.

Answer explanation

La fragmentación del ADN que ocurre durante la apoptosis es de tipo "internucleosomal", es decir, entre los nucleosomas (la estructura formada por el enrollamiento del ADN alrededor de las histonas).

En el esquema puede observarse a CAD (DNAsa activada por caspasas) cortando la doble hebra de ADN en sitios ubicados entre dos nucleosomas.

¿Cuál de las siguientes NO es indicativa de apoptosis?

• Prueba de BrdU, positiva.

• Prueba de TUNEL, positiva.

• Prueba de Anexina V/Ioduro de Propidio, positiva.

• Electroforesis de ADN con patrón "en escalera".

• Ensayo de actividad enzimática de caspasa-9, positivo.

Answer explanation

¿Por qué esos resultados son indicativos de apoptosis?

• - Prueba de TUNEL positiva: implica que el ADN fue fragmentado.

• 
  - Electroforesis de ADN con patrón "en escalera": implica que el ADN fue fragmentado de manera "ordenada" (es decir, no azarosa).

• 
  - Prueba de Anexina V positiva: Anexina V es una proteína que puede unirse a fosfatidilserina (PS). PS es un fosfolípido que durante la apoptosis pasa de la cara interna a la cara externa de la membrana plasmática. Dado que anexina V no puede atravesar la membrana plasmática, sólo puede unirse a PS cuando ésta se encuentra en la cara externa. Ver imagen.

¿Cuál de las siguientes es el link entre las vías extrínseca e intrínseca de la apoptosis?

• Caspasa 3 (ejecutora).

• Apoptosoma.

• Citocromo c.

• Bid (BH3-only).

• Bax.

Answer explanation

La unión de un ligando de muerte a un receptor de muerte promueve la activación de la caspasa 8. Esta caspasa es capaz de clivar ("romper") a una proteína BH3-only llamada Bid, generando bid truncado (tBid). tBid puede activar a Bax y Bak, estimulando la formación del poro en la membrana mitocondrial externa.

De esta manera, la activación de la vía EXtrínseca provoca la activación de la vía INtrínseca.

La vía extrínseca puede ser desatada de dos maneras. Una involucra la activación un receptor de muerte por unión de su ligando de muerte. ¿Cuál es la otra?

• Contacto directo con una célula que libera granzima al citoplasma de la célula apoptótica.

• Contacto directo con una célula que libera caspasas al citoplasma de la célula apoptótica.

• Daño al ADN producido por bacterias intracelulares.

• Unión de mitógenos a sus receptores de membrana plasmática.

Answer explanation

Una célula inmune detecta a una célula infectada, y libera dos proteínas: perforina y granzima. Perforina forma poros o canales en la membrana plasmática de la célula infectada, por los cuales ingresa granzima al citosol. Allí, granzima activa caspasas que provocan la muerte por apoptosis de la célula infectada.

Respecto del rol de p53 en la apoptosis, indique la INCORRECTA.

• Quinasas activadas por estrés celular inhiben a Mdm2, lo que impide la degradación de p53 en proteosomas.

• Cuando el daño al ADN no puede ser reparado, p53 puede desencadenar apoptosis.

• p53 es capaz de estimular la expresión de genes de proteínas pro-apoptóticas (como Bax o Fas).

• p53 es un regulador de la replicación del ADN, que actúa como heterodímero.

Answer explanation

p53 es un factor regulador de la transcripción que funciona como un homotetrámero.

Considerando que:

color marrón = tinción Bax positiva; sin color = tinción Bax negativa.

Indique la opción INCORRECTA.

• El precipitado marrón se observa en el citoplasma.

• En las células coloreadas se activaron las caspasas 3 y 7 (ejecutoras).

• El precipitado marrón se observa en el núcleo.

• Las células coloreadas experimentaron apoptosis.

• El ADN de las células coloreadas está fragmentado.

Considerando que tanto en "A" como en "B" la prueba de TUNEL resultó positiva, indique la INCORRECTA.

• En "A", las células murieron por apoptosis.

• En "B", las células murieron por necrosis.

• Una electroforesis del ADN de las células de "B", mostraría un extendido continuo.

• Una electroforesis del ADN de las células de "A", exhibiría una serie de bandas individuales bien definidas.

• En "A", el tejido muestra indicios de inflamación.

Answer explanation

Nótese que en "A" se tiñeron células individuales, mientras que en "B" se observa afectada un área que incluye muchas células.

Recuerde que la prueba TUNEL sirve para detectar ADN fragmentado, pero no distingue entre una fragmentación "ordenada" (por ejemplo, internucleosomal) y una fragmentación "al azar".