Western Blot

Na czym opiera się mechanizm działania metody Western blot?

• Reakcji kwasowo-zasadowej

• Reakcji oksydoredukcyjnej

• Reakcji enzym-substrat

• Reakcji antygen-przeciwciało

Co umożliwia rozdział białek ze względu na ich masę cząsteczkową w metodzie SDS-PAGE?

• Żelatyna

• SDS

• Tween20

• Albumina surowicy krwi bydlęcej

W jaki sposób można zablokować miejsca niespecyficznego wiązania na membranie w metodzie Western blot?

• Żelatyna

• Tween20

• Albumina surowicy krwi bydlęcej

• Mleko w proszku z dodatkiem detergentu

Co umożliwia elektroforeza SDS-PAGE w metodzie Western blot?

• Rozdział białek ze względu na ich kształt

• Rozdział białek ze względu na ich masę cząsteczkową

• Rozdział białek ze względu na ich ładunek

• Rozdział białek ze względu na ich strukturę trzeciorzędową

Jakie białka migrują szybciej podczas elektroforezy SDS-PAGE?

• Białka o mniejszej masie cząsteczkowej

• Białka o mniejszym ładunku

• Białka o większym ładunku

• Białka o większej masie cząsteczkowej

Jakie białka migrują w stronę anody podczas elektroforezy w metodzie Western blot?

• Białka o zmiennym ładunku

• Białka o neutralnym ładunku

• Białka o ujemnym ładunku

• Białka o dodatnim ładunku

Bazując na podanych informacjach oraz wiedzy własnej wyjaśnij, w którym momencie analizy białek metodą WB stosuje się barwienie Ponceau S oraz w jakim celu jest ten etap?

Na podstawie przedstawionego fragmentu tekstu, a także wiedzy własnej, wymień trzy najważniejsze składniki żelu, który przygotujesz w metodzie Western Blot.

Wybierz odpowiedź przedstawiającą prawidłową kolejność etapów metody WB (opris skrócony):

1. 1. Rozdział elektroforetyczny

2. 2. znakowanie p-ciałem Irz

3. 3. dodanie substratu

4. 4. znakowanie p-ciałem IIrz

5. 5. transfer na membranę

• 1,2,3,4,5

• 1,2,4,3,5

• 1,5,2,4,3

• 3,1,2,4,5

Jednym z etapów metody WB jest tzw "blokowanie", do którego używa się np. roztworu mleka w proszku. Celem blokowania jest zapobieganie niespecyficznym sygnałom, które mogą fałszować wynik końcowy testu. Posiadając tą wiedzę wybierz etap po którym następuje blokowanie.

• Po rozdziale elektroforetycznym

• Po transferze na membranę

• Po nałożeniu przeciwciał I rzędowych

• Po dodaniu enzymu