Técnicas en Biología Molecular

Preparar solución de Tris a 50mM (polvo)

• C1V1 = C2V2

• g = PM x M x V

• E = mc²

• Ninguna de las opciones

Preparar solución de EDTA al 50 mM a partir de un stock al 0.5 M:

• C1V1 = C2V2

• g = PM x M x V

• E = mc²

• Ninguna de las opciones

Células químicamente competentes:

• 1 M NiCl₂

• 50 mM Tris

• 0.1 M CaCl₂

• 50 mM EDTA

Criopreservados de E. coli:

• Congelar stock en glicerol y LB

• Congelar stock de plásmidos

• Congelar stock en Triton X-100

• Congelar stock de antibiótico

En Gibson:

• Requieres hacer PCR del inserto y del vector

• Consiste en cortar y pegar el inserto y vector

• Secuenciación de siguiente generación (NGS)

• No requieres transformar a E. coli

miniprep

• Sonicación

• Lisis alcalina

• Criopreservación

• Choque térmico

Transformación química de E. coli:

• Choque térmico a 95 ºC

• Desnaturalización a 4 ºC

• Precipitación a 37 ºC

• Choque térmico a 42 ºC

Eficiencia de transformación:

• La velocidad con la que las células se dividen

• La capacidad de las células para incorporar ADN exógeno

• El número de colonias que crecen por cm²

• La cantidad de ADN que se sintetiza durante la replicación

Cepa que no requiere antibiótico para crecer:

• SHuffle

• BL21(DE3)pLysS

• Rosetta-gami

• Ninguna de las opciones

BL21(DE3)pLysS

• Expresar proteínas con puentes disulfuro

• Expresar proteínas tóxicas

• Expresar proteínas con genes no optimizados

• Síntetizar plásmidos (clonación)