Lezione Oggioni 13-04

Cosa si intende per Bioremediation?

• Svolta ecologica delle aziende farmaceutiche. 

• L'utilizzo di prodotti di origine animale per la bonifica dei territori. 

• L'utilizzo di microrganismo per ripristinare i terreni inquinati. 

• I rimedi omeopatici della nonna. 

Dove campioniamo? 

• Sotto l’ascella del tuo compagno di banco. 

• Nel Navile. 

• Nelle narici dei bambini ricoverati in almeno 10 ospedali ben distribuiti sul territorio. 

• Acque inquinate dal BP3. 

Su cosa ci focalizziamo?

• Cluster di geni 

• Pathway metabolico 

• Prodotti di scarto del batterio 

• Quanti anni ha chi l’ha campionato 

Qual è il microbial chassis per eccellenza? 

• Escherichia coli 

• Mycobacterium tuberculosis 

• Treponema pallidum 

• Pseudomonas putida 

Che caratteristiche cercheresti se volessi fare una microbial chassis per il biorisanamento? (+ di una risposta giusta) 

• Ben caratterizzato 

• Facilmente manipolabile 

• Potenzialità di degradare + inquinanti 

• BLS 1 

• Inserimento di GFP 

In base alle caratteristiche elencate prima, quale fra questi organismi pensi possa essere più adatto come base di partenza per creare una NUOVA microbial chassis per il biorisanamento?

• E.Coli (ben caratterizzato, crescita rapida, economico) 

• Rhodococcus Opacus (manipolabile geneticamente, produzione di TAGs e licopene, cresce in presenza di inquinanti come PET e PCB) 

• Bacillus Subtilis (BLS1, alta tolleranza a stress, proteine secrete nello spazio extracellulare) 

• Pseudomonas putida (alta tolleranza a stress chimico, usa composti tossici come fonte di carbonio, produce biosurfattanti) 

Cosa si serve per permettere la replicazione del plasmide in E.Coli?

• T7 RNA pol 

• Sequenze omologia 

• Ori E.Coli 

• Ori Rhodococcus Opacus 

• pNit 

Cosa ci serve per selezionare le colonie trasformate con il plasmide in E.Coli? 

• Resistenza Rhodococcus 

• lacZ 

• Sequenze omologia 

• GFP 

• KanR 

Siccome dobbiamo integrare il costrutto nel genoma ci servirà creare un plasmide suicida. Per renderlo tale che sistema posso usare fra quelli elencati?  

• Resistenza Rhodococcus 

• pNit 

• Sequenze omologia 

• SacB 

• Cre/loxP 

Visto che il costrutto per integrarsi dovrà fare ricombinazione omologa con il genoma di Rhodococcus cosa ci serve?   

• Resistenza Rhodococcus 

• pNit 

• Sequenze omologia 

• Cre/loxP 

• T7 RNA pol