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En el proceso de replicación de ADN eucariota se observa que:
Puede iniciarse en cualquier posición de las secuencias de ADN
Se caracteriza por ser un proceso mayormente disperso
Oligonucleótidos de ARN actúan como cebadores (primers) en ambas cadenas
Los telómeros son replicados usando como molde una secuencia de ADN conservada
Las ADN polimerasas δ y ε que participan en el proceso de replicación del ADN
Añaden desoxinucleótidos solamente en el extremo 3´
Inician la polimerización independientemente de la presencia de cebador (primer) en la cadena adelantada
La polimerización del ADN procese en dirección 3´-5´ mediante uniones fosfodiéster
Carecen de actividad 3´exonucleasa
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se diferencia de la replicación in vivo del ADN de eucariotas en que la PCR:
Se utilizan cebadores (primers) que son oligonucleótidos de ARN
La enzima Taq polimerasa no introduce errores en el copiado
El incremento de temperatura permite la desnaturalización de las hebras de ADN
Requiere de una helicasa y ligasa distinta a la replicación in vivo
Hay descriptos diferentes formas de proteínas que actúan como receptores estrogénicos (ER), ejemplo ER alfa y ER beta; cada uno codificado por genes distintos y se expresan en tejidos distintos, aunque el ligando es el mismo. En las células endometriales se observa la presencia de receptores ER beta. Esto ejemplifica los siguientes mecanismos celulares-moleculares involucrados:
Corte-empalme alternativo (Splicing altrenativo) en cada tejido
Recombinación génica en cada tejido
Expresión génica diferencial en cada tejido
Glicosilación diferencial de las proteínas receptoras en cada tejido
La expresión del receptor ER alfa puede estar regulada por la acción de diferentes microARN, entre ellos el micro ARN-206. Esto podría producirse en base al siguiente mecanismo:
El microARN se une al ARN mensajero disminuyendo su vida media
El microARN se une al ARN mensajero aumentando su traducción
El microARN favorece la ubiquitinización del ARN mensajero
El microARN se une al ARN mensajero impidiendo su exportación al citosol.
Luego de la unión ligando-receptor de estrógenos, se puede observar diferentes eventos que median la respuesta celular, por ejemplo, la liberación de una proteína específica desde el citosol al núcleo (acción en nucleoplasma), en estos eventos se observa que:
La proteína se mantenia en el citosol aunque su acción en el nucleoplasma porque la chaperona ocultaba el sitio señal de localización nuclear (NSL) de la protéina
La proteína se transloca al núcleo, quanque no tenga en su secuencia la señal de localización nuclear (NSL) porque la liberación de la chaperona es suficiente para la translocación
El proceso de translocación de la proteína al núcleo es mediado por vesículas revestidas de
clatrina y direccionadas por el complejo multiproteico SNARE-Rab GTPasa nucleares
El proceso de translocación de la proteína al núcleo es mediado por importinas que son
proteínas carrier de transmembrana de la envoltura nuclear
Una vez en el nucleoplasma, esta proteína específica permite el reclutamiento de la enzima
Histona acetil transferasa (HAT) que participará del proceso de remodelación de la cromatina
en ciertos dominios génicos, usted esperaría que esto produzca:
Favorecimiento de la trascripción al posibilitar la descondensación cromatínica
Podría interpretarse que la acción de esta proteína es reclutar correpresores
Desfavorecimiento de la transcripción al posibilitar la condensación cromatínica
El agregado de grupos acetilos a las histonas mediados por la HAT aumenta la afinidad de
las Histonas por el ADN
La localización subcelular de una proteína puede determinarse con la tecnología de ADN
recombinante, mediante:
La expresión de un ARN de interferencia del transcripto de esa proteína.
La amplificación del gen de la proteína mediante PCR
La utilización de vectores virales para regular negativamente la expresión de la proteína.
La expresión de una proteína de fusión con una proteína fluorescente.
