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WorksheetsImuno-histoquímica
Total questions: 20
Worksheet time: 2hrs 33mins
Assinale as vantagens de um anticorpo monoclonal
Possui um especificidade razoável quando comparado ao policlonal
Apresenta baixo custo de produção
Gera marcação de fundo
Possui alta afinidade
Uma boa fixação e tamponamento do fixador são ainda mais cruciais quando se utiliza anticorpos monoclonais
VERDADEIRO
FALSO
O método de imuno-histoquímica representado nessa figura é:
direto
indireto
Peroxidase Anti-Peroxidase
Fosfatase Alcalina Anti-Fosfatase Alcalina
O método de detecção indireta é mais sensível por permitir que o sinal observado seja amplificado devido a utilização de um segundo anticorpo marcado
VERDADEIRO
FALSO
Existem no mercado anticorpos secundários ligados a diferentes substâncias. Observe na imagem os pontos pretos em volta de partículas do coronavírus bovino, identificados pelas setas. O marcador acoplado no anticorpo secundário dessa reação deve ser:
enzimas
substâncias fluorescentes
partículas de ouro
elementos radioativos
Na imunofluorescência, o fluoróforo é uma molécula capaz de absorver luz em um comprimento de onda e emitir em um comprimento de onda maior
VERDADEIRO
FALSO
Existem marcadores fluorescente que tem alta afinidade por ácidos nucleicos e são utilizados na marcação do núcleo celular. Na imagem, para marcação do núcleo foi utilizado:
Iodeto de propídio
Brometo de etídio
DAPI
Falodina
Na imagem, espermatozoides de equino incubados com (a) FITC-PSA / PI em (b) Mitotracker Red CMXRos. Sobre os marcadores utilizados podemos afirmar:
Trata-se de marcadores fluorescentes para organelas especificas que permitem análises funcionais
Mitotracker Red CMXRos emite fluorescência verde indicando alta atividade mitocondrial.
FITC-PSA é uma lecitina conjugada a FITC usada para marcação da atividade mitocondrial
PI é um marcador que emite fluorescência verde comumente utilizado para observação do acrossoma
A peroxidase ou HRP é um dos marcadores enzimáticos mais utilizando na imunohistoquímica. A reação desse marcador é um produto insolúvel e colorido. Sobre essa reação é correto afirmar:
A redução do HRP gera o produto insolúvel e colorido
Na presença do substrato natural do HRP ocorre sua redução
A presença de H2O2 promove a oxidação do HRP
A coloração do HRP reduzido é castanha
A reação de imuno-histoquímica revelada pela DAB é solúvel em álcool e xilol, portanto impede a confecção de lâminas permanentes dessa reação.
VERDADEIRO
FALSO
Assinale as características corretas da imuno-histoquímica (IHC) utilizando a peroxidade e DAB.
Permite a montagem de lâminas permanentes
Pode ser utilizada na microscopia eletrônica de transmissão
Exige um etapa de bloqueio da peroxidase endógena para evitar marcação inespecífica
É um método seguro por não utilizar substâncias tóxicas
Observe a imagem e assinale as alternativas corretas sobre essa reação.
Trata-se de uma reação de amplificação da marcação
Existem no mercado apenas anticorpos secundários biotinilados
HRP é um exemplo de enzima ligada a estreptavidina
A enzima pode ser substituída por um fluoróforo
As etapas de fixação e preparo do material biológico são cruciais para o sucesso da IHC. Sobre essas etapas, assinale as alternativas corretas:
A solução de bouin acético é um bom fixador para imunoflourescência
Cortes congelados preservam melhor os antígenos em relação aos cortes de parafina
A desidratação e diafanização não alteram a imunorreatividade dos tecidos
Durante impregnação e inclusão do material em parafina deve-se evitar que a temperatura ultrapasse 60°C
Sobre a afixação dos cortes e células as lâminas ou lamínulas para realização de IHC. Assinale a alternativa correta:
A poli-L-lisina é uma substância utilizada para afixação de material biológico a lâmina, porém na IHC deve-se evitar o seu uso por não ser um composto inerte
O silano é um composto inerte que pode ser utilizado nessa etapa, auxiliando a afixação do material biológico a lâmina
A albumina é uma opção econômica para essa etapa, sendo facilmente obtida da clara do ovo
As lâminas que receberam tratamento para auxiliar na afixação do corte e células, devem ser utilizadas imediatamente após o tratamento.
A etapa dessa videoaula é da recuperação antigênica, importante no desmascaramento dos sítios antigênicos. Assinale as alternativas que contém opções de protocolo comumente realizados para recuperação antigênica:
Digestão enzimática com pepsina a 0,5% em HCl
Digestão em tripsina 0,05% com CaCl2 0,1%
Calor em tampão citrato 0,01M pH6,0 por 10 a 30 min
Peróxido de hidrogênio a 0,3% em metanol
A etapa de imersão dos cortes histológicos em solução de peróxido de hidrogênio a 3% em metanol por 10 a 30 min quando for utilizado o marcador peroxidase é recomendada, EXCETO:
Quando se trata de tecidos ricos em peroxidase como SNC
Quando são células sanguíneas, como eritrócitos e granulócitos
Na detecção de antígenos de superfície de membrana
O bloqueio de ligações inespecíficas, especialmente de tecidos ricos em matriz extracelular, como tecido conjuntivo, por ser realizado utilizando a solução de:
Albumina sérica bovina 1 a 2% em PBS
Leite em pó desnatado sem cálcio a 5% em PBS
Soro fetal bovino 1 a 2% em PBS
IgG purificada 5 µg/mL da mesma espécie do anticorpo secundário
A incubação com anticorpo primário é uma etapa crítica de toda a reação de IHC. Quando optamos pela aquisição de um anticorpo comercializado devemos observar algumas características antes de adquiri-lo. Entre no site da ABCAM (www.abcam.com), uma das empresas comerciais de anticorpos com representação no BR. Escolha um anticorpo primário monoclonal para detecção do receptor beta de estrógeno em secções histológicas do ovário de macaca incluído em parafina. Esse anticorpo também vai ser utilizado para reação de Western blotting para confirmação de sua especificidade. Responda colocando apenas o código do anticorpo no espaço abaixo (por exemplo: ab 203)
(a)
Pensando na reação anterior, escolha, no site da mesma empresa, um anticorpo secundário, produzido em cabra, conjugado a um marcador enzimático. Responda no espaço abaixo apenas o código do anticorpo (por exemplo, ab 20343
(a)
Suponha que você irá realizar o bloqueio das ligações inespecíficas utilizando um anticorpo isotípico da reação anterior. Escolha um anticorpo com essa função no site da empresa. Responda com o código do anticorpo (por exemplo: ab170245)
(a)
