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WorksheetsBG - Práctica extracción ADN (Abril 2021)
Total questions: 25
Worksheet time: 13mins
¡Señala la falsa!: Con las técnicas moleculares actuales, la extracción y caracterización del ADN nos permite:
Realizar pruebas genéticas
Calcular el peso de un organismo
Conocer la clasificación taxonómica de un organismo
El análisis de pruebas forenses
Para una buena caracterización del ADN:
Debemos obtener una molécula purificada
No importa que la muestra final esté asociada con proteínas
Necesitamos saber el peso molecular de la muestra
Debemos acceder al núcleo de las células
En el nucleo celular de las células humanas encontramos aproximadamente:
50 cm de ADN
2 m de ADN
Solo 2 m de ARN
10 m de ADN
¡Señala la falsa! Las fases para el aislamiento de una muestra de ADN son:
Seleccionar el tipo de células apropiadas para la extracción
Asegurarnos de no romper las celulas porque se nos perdería el ADN
Purificar el ADN de proteínas y restos celulares
Concentrar el ADN purificado
Con el hisopo podemos aislar células de:
la sangre
el pelo
las fosas nasales
la boca
La solución de lisis nos ayudará:
A mantener las células vivas
A mantener el ADN en el interior del núcleo
A romper las células y el núcleo para liberar el ADN
A teñir de color el ADN
Con el uso de la micropipeta podemos:
Dispensar un volumen exacto de un líquido
Dispensar el peso exacto de un sólido
Exclusivamente pipetear la solución de lisis
Romper las células físicamente
La solución de lisis es una combinación de:
Un tampón y un ácido
Dos detergentes
Varias enzimas de hidrólisis
Un detergente y una enzima (proteinasa K)
La enzima proteinasa K:
Compacta la molécula de ADN
Funciona mejor a una temperatura entre 30 y 40ºC
Separa el ADN de las proteinas (histonas)
Funciona mejor en frío (<20ºC)
La adición posterior de una solución salina:
Precipita las proteínas y los desechos celulares
Modifica el pH de la mezcla
Precipita el ADN que está ya aislado
Une de nuevo el ADN solo con las proteínas
Para poder trabajar con la centrífuga de tubos Eppendorf:
Simplemente metemos los tubos y cerramos la tapa
Necesitamos seleccionar velocidad y tiempo
Necesitamos equilibrar organizando tubos por pares
No necesitamos mantener el orden en el rotor
Con el proceso de centrifugación conseguimos:
Recuperar la solución de lisis
Separar material particulado de una suspensión
Que el ADN precipite
Que las proteinas y residuos celulares precipiten
Una vez separado el sobrenadante que contiene el ADN disuelto, conseguiremos aislar el ADN concentrado...
Añadiendo de nuevo la solución salina
Añadiendo alcohol isopropílico
Añadiendo un volumen de tampón fosfato
Añadiendo 1 mL de la solución de lisis
El ADN:
Es altamente hidrofílico
Es insoluble en solventes polares
Es insoluble en alcohol isopropílico
Es insoluble en solventes orgánicos (apolares)
Una vez añadido y mezclado con alcohol isopropílico, el ADN insoluble puede ser separado a partir de un proceso de:
Filtración
Desnaturalización
Congelación
Centrifugación
Tras el proceso de centrifugación ¿dónde se encuentra el ADN?
En el precipitado/pellet que debemos separar y guardar
En el sobrenadante que debemos congelar
Todavía no lo hemos conseguido separar
El DNA todavía está disuelto en la solución
¡Señala la falsa! Una vez separado, el ADN debe ser:
Congelado
Secado
Resuspendido en una solución tampón
Utilizado directamente para que no se desnaturalize
En el ejemplo posterior descrito en el video, se realiza la extracción de ADN a partir de una muestra de:
Algas
Rotíferos
Guisantes
Brócoli
¡Señala la falsa! En el desarrollo de la extracción casera de ADN el proceso de extracción comienza con:
La preparación de una suspensión de guisantes, agua y sal
La disgregación de los guisantes con una licuadora
La filtración y adición de detergente a la solución
La adición de detergente al residuo retenido en el colador
Para la disgregación del núcleo utilizaremos:
Agua
Detergentes polares que rompen la membrana nuclear
Solución ácida que hidroliza las membranas
No necesitamos romper el núcleo celular
Para purificar el ADN en este caso de ejemplo, podemos utilizar:
Zumo de piña
Ablandador de carne
Leche
Solución limpiadora de lentes
Para separar el ADN de los restos celulares utilizaremos:
Leche
Clara de huevo
Alcohol etílico 70-95º
Isopropanol, si lo conseguimos
Observaremos el ADN:
En la interfase entre el agua y el etanol
En el etanol
En el agua
En el precipitado del fondo del tubo
Recordatorio. Las histonas son proteinas:
Que encontramos en todos los orgánulos celulares
Que juegan un papel clave en la recuperación de ADN dañado
Que protegen y estabilizan el ADN
No están relacionadas con el ADN
En otras prácticas hemos hablado de la estructura de las algas. ¿Cuál es el problema para conseguir aislar gran cantidad de ADN a partir de algas?
Se hace igual, no hay ningún problema
Necesitamos trabajar con agua de mar
Una pared celular compleja difícil de romper
Las algas no tienen ADN
