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WorksheetsBiologia molecolare 5-6
Total questions: 20
Worksheet time: 15mins
La PCR:
È una metodica che richiede moltissime molecole di DNA stampo per essere efficace
Può essere utilizzata per ottenere un frammento di DNA da inserire in un vettore di clonaggio
Si basa sull’utilizzo di una polimerasi ad alta precisione
È una reazione di amplificazione esponenziale del DNA
La PCR real time:
Si basa sull’uso di sostanze fluorescenti che evidenziano in tempo reale la quantità di DNA sintetizzato
Permette di dosare una molecola di acido nucleico appena questa viene sintetizzata
Permette di amplificare il DNA più velocemente della normale PCR
Viene analizzata compimento
Quali delle seguenti affermazioni sulla PCR sono corrette?
Permette di fare delle diagnosi molecolari anche partendo da una singola cellula
Può amplificare facilmente regioni genomiche più lunghe di 100.000 basi
Richiede DNA stampo in perfette condizioni per poter funzionare correttamente
Fornisce sempre informazioni quantitative
La PCR:
Può essere utilizzata per aggiungere delle sequenze etichetta o un frammento da clonare
Può amplificare efficiente mente frammenti anche molto lunghi
Può essere utilizzata per il clonaggio direzionale dei frammenti amplificati
Non è accurata perché la Taq polimerasi non possiede attività esonucleasica
La PCR in emulsione permette di:
Amplificare moltissimi frammenti di DNA contemporaneamente
Sequenziare moltissimi frammenti di DNA contemporaneamente
Amplificare molti genomi contemporaneamente
Clonare moltissimi frammenti di DNA contemporaneamente
Quali delle seguenti sono applicazioni utili della PCR:
Rilevazione dei polimorfismi
Generazione di sonde specifiche
Clonaggio dei frammenti amplificati
Costruzione di librerie genomiche
I marcatori di tipo STR (short tandem repeat), o microsatelliti:
Vengono evidenziati con più difficoltà rispetto agli RFLP
Sono utilizzati per i test di paternità ma non per le indagini di medicina legale
Presentano un grado di polimorfismo molto elevato nella popolazione
Non vengono evidenziati mediante PCR
Il clonaggio direzionale:
Può essere effettuato anche quando il frammento da clonare è amplificato tramite PCR
Serve a generare costrutti di espressione
È sempre necessario se si vuole sequenziare il frammento clonato
Può essere effettuato sfruttando due diversi enzimi di restrizione
Quale affermazione è vera: per amplificare un frammento di DNA tramite PCR
Bisogna conoscerne la sequenza alle due estremità
Non è necessario avere informazioni sulla sequenza
Bisogna conoscere l’intera sequenza
È necessario disporre di due oligonucleotidi sintetici e della taq polimerasi
Come si può diagnosticare il cambiamento di una singola base nel DNA genomico di un soggetto?
Amplificazione allele specifico
Fluorescent in situ hybridization
Amplificazione mediante PCR e digestione dell’amplificato
Northern blot
A cosa servono i marcatori ad alta densità come gli SNPs?
A definire i caratteri complessi
Al DNA fingerprint attualmente utilizzato
Ad identificare varianti alleliche correlate a stati patologici/predisponenti a malattia
Ad identificare gli pseudogeni
I polimorfismi del DNA:
Sono utili solo quando coincidono con un polimorfismo di restrizione
Sono piuttosto rari e per questo molto preziosi
Possono essere utilizzati per mappare i geni e gli alleli
Possono essere solo di singolo nucleotide, altrimenti si chiamano satelliti
Quali delle seguenti affermazioni sono corrette?
Gli RFLP vengono evidenziati utilizzando il Northern blot
Variazioni di singolo nucleotide nella sequenza del DNA possono dare origine ad RFLP
Gli STR sono più utili degli RFLP perché in genere sono molto più polimorfici
Gli STR permettono di determinare un profilo genetico da tracce di materiale biologico perché vengono evidenziati utilizzando la PCR
Quali dei seguenti rappresentano i vantaggi della PCR:
L’accuratezza
L’estrema lunghezza dei frammenti sintetizzati
L’estrema sensibilità
La rapidità
Quali sono i polimorfismi del DNA attualmente analizzati nel DNA fingerprint mediante PCR?
I polimorfismi dei microsatelliti
I polimorfismi dei minisatelliti
I polimorfismi di sito di restrizione
I polimorfismi di singolo nucleotide
I marcatori di tipo STR (short tandem repeat), o microsatelliti:
Sono utilizzati nel DNA fingerprint in quanto non eccessivamente polimorfici
Non permettono di effettuare il test di paternità
Vengono evidenziati mediante digestione con enzimi di restrizione seguita da Southern blot
Permettono di effettuare i test di zigosità gemellare
La tipizzazione degli individui (DNA fingerprint):
Non permette di definire senza margine di errore la paternità
È stato possibile solo dopo aver sviluppato la PCR
È fortemente potenziata dall’uso della PCR
È utilizzata sia in indagini forensi che in test di paternità
Il coverage:
E' essenziale per definire il numero di sequenze ripetute presenti nel genoma
E' il numero di volte che una singola base e' stata sequenziata
Indica il numero minimo di sequenze necessarie per definire come completamente sequenziato un genoma
E' un parametro che permette di stimare la frazione di genoma sequenziata
Il coverage
il numero minimo di sequenze che sono necessarie per essere sicuri di aver sequenziato tutto il genoma
il numero di volte che le zone eterocromatiniche del genoma sono sequenziate
il numero di volte che un gene è stato sequenziato
il numero di genomi individuali che sono stati sequenziati
I gemelli omozigoti:
Presentano identici RFLP
Sono gli unici che presentino identici DNA fingerprints
Possono presentare delle differenze nel fingerprint dovute a modificazioni epigenetiche
Non possono essere distinti in base al loro DNA
