Биологиялық препараттарды дайындау әдістері, оларды бояу

Биологиялық препараттарды дайындау әдістері, оларды бояу

by Ainur Matina

Жұмыстың мақсаты: Препараттарды дайындау, Грамм әдісі бойынша бояу әдістерін және дәрілік және бекітілген жасушаларды зерттеу ерекшеліктерін меңгеру.

​

Теориялық негіздеме. Биологиялық препараттарды дайындау әдісін таңдау Зерттеудің мақсаты мен объектісіне байланысты. Микробиологияда көбінесе бекітілген препараттар қолданылады, олардың ішінде жасушалар өлтіріліп, слайдқа бекітіледі. Бекітілген жағынды қарапайым немесе күрделі бояу әдісімен боялуы мүмкін. Қарапайым бояумен бір бояғыш қолданылады және морфологиялық қасиеттері анықталады-жасушалардың пішіні, өзара орналасуы және мөлшері. Препараттардың күрделі бояуы препаратты бірнеше бояғыштармен дәйекті бояудан тұрады және жасуша түрлерін ажыратуға немесе жасуша құрылымын анықтауға мүмкіндік береді. Күрделі бояудың мысалы-микроорганизмнің түрін анықтаудың маңызды кезеңі болып табылатын граммен бояу. Генцианвиолет пен йодпен күшті, ерімейтін күлгін түсті қосылыс түзуге қабілетті бактерия жасушалары грамоң деп аталады. Басқалары салықтан кейінгі өңдеуден кейін алкогольмен түссізденеді және грам-теріс деп аталады. Препараттарды бояу үшін сулы немесе спиртті ерітінділер түрінде анилин бояғыштары қолданылады. Негізгі, қышқыл және бейтарап бояғыштарды ажыратыңыз. Микроорганизмдердің түсі-бұл бояғыш пен жасуша заты арасындағы химиялық жақындық, капиллярлық, сіңіру құбылыстарымен байланысты күрделі физика-химиялық процесс. Микробиологияда көбінесе негізгі бояғыштар қолданылады, олар бактерия жасушасының негізін құрайтын қышқыл табиғат қосылыстарына өте жақын. Кейбір бояғыштар мыналарға қатысты селективтілікке ие жасушаның жеке компоненттеріне (ядролық затқа, қосындыларға) қолданылады. Ең жиі қолданылатын бояғыштарға метилен көк (Леффлер ерітіндісі), фуксин жатады.

​

​

Аппаратура және материалдар: микроскоп, бояғыштар жинағы бар штатив, тушь, бактериологиялық ілмектер, пипеткалар, заттық және жабын шынылары, тығыз қоректік орталардағы (Петри тостағандары) және сұйық қоректік орталардағы (пробиркалар) дақыл микроағзалары, ашық су айдындарынан алынған су; қосалқы жабдықтар мен материалдар (спиртовкалар, шыны кюветтер, дистилденген суы бар сыйымдылықтар, Сүзгіш қағаз және т. б.).

​

​

Қауіпсіздік техникасы. Жұмыста алкоголь қыздырғышының ашық жалыны қолданылатындықтан, алкоголь үстінде қолдардың қарама-қарсы қозғалыстарын болдырмас үшін жұмыс орнын дұрыс дайындауға ерекше назар аудару керек. Халаттар түймеленеді, шаш орамалдың немесе бас киімнің астына жиналады. Микроорганизмдермен барлық жұмыстар тек жанып тұрған спирттің атмосферасында ғана жүзеге асырылады! Микроорганизмдердің колониялары бар Петри шыныаяқтарымен жұмыс жасағанда, қақпақты ашпай, сәл ашу керек!

​

Жұмысты орындау тәртібі мен әдістемесі:

​

​

​

1. Әдістерінің мақсаты мен мәнін зерттеу

​

2. Тығыз сұйық қоректік ортада микроорганизмдердің колонияларынан бекітілген соққыларды дайындаңыз, оларды қарапайым әдіспен бояңыз, әртүрлі үлкейту кезінде субмикроскоппен қарап, бояңыз.

​

Белгіленген боялған препаратты дайындауға 4 негізгі кезеңнен тұрады. ​

1. Жағындыны дайындау. Шыныға бір тамшы су жағылады, стерильді бактериологиялық цикл тығыз қоректік ортадан алынған аз мөлшерде зерттелетін материалды енгізеді. Материал бір тамшымен мұқият араластырылады және жұқа қабатпен оны 2-3 см² алаңға ілмекпен таратады (жағады), сұйық биологиялық объектілерді немесе дақылдарды, өсірілген жемдік қоректік орталарды пайдаланғаннан кейін бір тамшы су жағылмайды. ​

2. Кептіру. Жағынды ауада немесе спиртовка жалынының үстінде жылы ауа ағынында кептіріледі. ​

3. Бақылау. Толығымен кептірілген жағынды жалынның жоғарғы бөлігінен 3-4 рет өткізіледі. Кезінде тіркеу жасушалары өледі, ол қауіпсіздік және үздік бояулардың сырлануы қамтамасыз етіледі, "Ұсақталған тамшы" препаратын дайындау үшін заттық шыны стерилді тамшуырмен сұйық биологиялық объектінің немесе судың тамшысы жағылады, стерильді бактериологиялық циклмен бірге зерттелетін биологиялық объект (мысалы, микроорганизмдер мәдениеті) енгізіледі. Тамшы сұйықтықта ауа көпіршіктері пайда болмас үшін шыны қабықпен жабылған. Артық сұйықтық сүзгі қағазымен жойылады. Препаратты дайындау үшін суспензияның тамшысына бояу қосылады, бұл тірі және өлі жасушаларды саралауға мүмкіндік береді. "Висячаякапля" препаратын дайындау үшін зерттелетін объектінің бір тамшысы жабын шынысына жағылады және оған шеттері алдын ала вазелинмен майланатын тесігі бар арнайы заттық шыны Мұқият орналастырылады. Тамшы орталықты тереңдетуге еркін сәйкес келуі керек. Препарат төңкеріліп, әртүрлі үлкейту кезінде қаралады.

​

Бақылау сұрақтары

​

1. Микроб жасушасына цитохимиялық талдау не үшін қолданылады?

​

2. Микроб жасушасын фиксациялау дегену дегенміз не?

​

3. Микроб клеткасын бояудың қандай түрлері бар?

​

4. Микроб клеткасын қарапайым бояу әдісіне түсініктеме беріңіз.

​

5. Микроб жасушасын дифференциалды бояу дегеніміз не? Қандай дифференциалды бояу әдістерін білесіз?

​

6. Грам оң және Грам теріс бактериялардың жасуша қабығындағы айырмашылықтарды көрсетіңіз.

​