HPLC

HPLC (High Perfomance Liquid Chromatography)

​Definisi

Salah satu teknik kromatografi untuk zat cair yang disertai dengan tekanan tinggi kisaran 500-6000 psi bertujuan untuk memisahkan molekul.

Dasar Pemisahan

1. perbedaan afinitas

2. filtrasi gel

3. ion yang berpasangan

Padatan

Fase diam

Cairan

Fase gerak

Wujud Zat

Prinsip kerja

Fase gerak dialirkan menuju kolom (fase diam) dengan bantuan pompa. Sampel diinjeksikan ke aliran fase gerak menuju kolom (fase diam) terjadi pemisahan senyawa-senyawa dalam kolom berdasarkan perbedaan kepolaran. Senyawa yang berinteraksi dengan fase diam akan lebih lama keluar dari kolom dan sebaliknya. Senyawa yang keluar dari kolom akan masuk ke detektor mendeteksi keberadaan komponen yang telah melewati kolom. Detektor yang mendeteksi keberadaan komponen yang telah melewati kolom memberikan sinyal elektronik pada pengolah data ditampilkan output visual hasil analisis dalam bentuk kromatogram.

​Komponen HPLC

Eluen berfungsi sebagai pembawa menuju kolom.

​Syarat memilih eluen

1. kemurnian yang tinggi (tidak terkontaminasi).

2. kestabilan yang tinggi (tidak bereaksi dengan sampel dan fase diam).

3. kekentalan rendah (kerapatan eluen sekecil mungkin)

4. dapat melarutkan sampel tetapi tidak mengubah sifat kolom dan cocok dengan detektor.

5. inert

6. pelarutnya tidak toksik.