Choices generales

En el proceso de replicación de ADN eucariota se observa que:

• Puede iniciarse en cualquier posición de las secuencias de ADN

• Se caracteriza por ser un proceso mayormente disperso

• Oligonucleótidos de ARN actúan como cebadores (primers) en ambas cadenas

• Los telómeros son replicados usando como molde una secuencia de ADN conservada

Las ADN polimerasas δ y ε que participan en el proceso de replicación del ADN

• Añaden desoxinucleótidos solamente en el extremo 3´

• Inician la polimerización independientemente de la presencia de cebador (primer) en la cadena adelantada

• La polimerización del ADN procese en dirección 3´-5´ mediante uniones fosfodiéster

• Carecen de actividad 3´exonucleasa

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se diferencia de la replicación in vivo del ADN de eucariotas en que la PCR:

• Se utilizan cebadores (primers) que son oligonucleótidos de ARN

• La enzima Taq polimerasa no introduce errores en el copiado

• El incremento de temperatura permite la desnaturalización de las hebras de ADN

• Requiere de una helicasa y ligasa distinta a la replicación in vivo

Hay descriptos diferentes formas de proteínas que actúan como receptores estrogénicos (ER), ejemplo ER alfa y ER beta; cada uno codificado por genes distintos y se expresan en tejidos distintos, aunque el ligando es el mismo. En las células endometriales se observa la presencia de receptores ER beta. Esto ejemplifica los siguientes mecanismos celulares-moleculares involucrados:

• Corte-empalme alternativo (Splicing altrenativo) en cada tejido

• Recombinación génica en cada tejido

• Expresión génica diferencial en cada tejido

• Glicosilación diferencial de las proteínas receptoras en cada tejido

La expresión del receptor ER alfa puede estar regulada por la acción de diferentes microARN, entre ellos el micro ARN-206. Esto podría producirse en base al siguiente mecanismo:

• El microARN se une al ARN mensajero disminuyendo su vida media

• El microARN se une al ARN mensajero aumentando su traducción

• El microARN favorece la ubiquitinización del ARN mensajero

• El microARN se une al ARN mensajero impidiendo su exportación al citosol.

Luego de la unión ligando-receptor de estrógenos, se puede observar diferentes eventos que median la respuesta celular, por ejemplo, la liberación de una proteína específica desde el citosol al núcleo (acción en nucleoplasma), en estos eventos se observa que:

• La proteína se mantenia en el citosol aunque su acción en el nucleoplasma porque la chaperona ocultaba el sitio señal de localización nuclear (NSL) de la protéina

• La proteína se transloca al núcleo, quanque no tenga en su secuencia la señal de localización nuclear (NSL) porque la liberación de la chaperona es suficiente para la translocación

• El proceso de translocación de la proteína al núcleo es mediado por vesículas revestidas de

  clatrina y direccionadas por el complejo multiproteico SNARE-Rab GTPasa nucleares

• El proceso de translocación de la proteína al núcleo es mediado por importinas que son

  proteínas carrier de transmembrana de la envoltura nuclear

Una vez en el nucleoplasma, esta proteína específica permite el reclutamiento de la enzima

Histona acetil transferasa (HAT) que participará del proceso de remodelación de la cromatina

en ciertos dominios génicos, usted esperaría que esto produzca:

• Favorecimiento de la trascripción al posibilitar la descondensación cromatínica

• Podría interpretarse que la acción de esta proteína es reclutar correpresores

• Desfavorecimiento de la transcripción al posibilitar la condensación cromatínica

• El agregado de grupos acetilos a las histonas mediados por la HAT aumenta la afinidad de

  las Histonas por el ADN

La localización subcelular de una proteína puede determinarse con la tecnología de ADN

recombinante, mediante:

• La expresión de un ARN de interferencia del transcripto de esa proteína.

• La amplificación del gen de la proteína mediante PCR

• La utilización de vectores virales para regular negativamente la expresión de la proteína.

• La expresión de una proteína de fusión con una proteína fluorescente.