CRISPR/Cas9

La enzima Cas9 corta...

• Upstream de la secuencia PAM 5'-3'

• Downstream de la secuencia PAM 5'-3'

• 6 nucléotidos después de la secuencia PAM

• No necesita la secuencia PAM para cortar

Si queremos inactivar un gen (hacer un KO), ¿qué elementos son imprescindibles para el sistema CRISPR/Cas)?

• Cas9 + gRNA + DNA molde

• Cas9 + gRNA + enzima de restricción

• Cas9 + gRNA

• Cas9 + gRNA + DNA polimerasa

¿Cuál de las siguientes características no es aplicable al RNA guía?

• Tiene un tamaño aproximado de 20 nucléotidos

• Debe ser complementario a la región donde queremos llevar la Cas9

• Tiene la secuencia PAM al inicio

• Tiene que ser muy específico para evitar efectos off-targets

La herramienta CRISPR/Cas9 NO se puede utilizar para...

• Inactivar un gen

• Modificar una mutación

• Introducir una mutación

• Introducir una secuencia exógena en el genoma

• Todas son aplicaciones del sistema CRISPR/cas9

¿Cuál de las siguientes secuencias NO es una secuencia PAM?

• 5' TGG 3'

• 5' CGG 3'

• 3' GGA 5'

• 3' AGG 5'