MasterGyE-TGyC

La Terapia Génica (TG) y las Terapias de Edición Génica (TdEG).

• Todas las TGs son consideras TdEG

• Todas las TdEG son consideradas TG

• Las TdEG no se consideran TG

• Sólo la TdEG de adición se consideran TG

Nombra la Nucleasa que demostró por primera vez la posibilidad de usar edición génica en células de Mamífero

• CRISPR-CAS9

• Zinc-Finger Nucleasa

• Mega Nucleasas
  (I-Sce I)

• TALE nucleasas

Nombra la primera nucleasa diseñada artificialmente por el hombre, que permite (con mucho trabajo) cambiar su secuencia diana.

• CRISPR-CAS9

• Zinc-Finger Nucleasa

• Mega Nucleasas
  (I-Sce I)

• TALE nucleasas

Nombra la nucleasa modular diseñada artificialmente por el hombre, que permite predecir y cambiar cambiar su secuencia diana.

• CRISPR-CAS9

• Zinc-Finger Nucleasa

• Mega Nucleasas
  (I-Sce I)

• TALE nucleasas

NO seleciones la nucleasa programable que permite la selección del sitio de corte mediante la sustitición de 20 nts en la guía de RNA que dirige la nucleasa a su diana y que ha revolucionado el campo del terapia génica acelerando la investigación y abaratando los costes.

• CRISPR-CAS9

• Zinc-Finger Nucleasa

• Mega Nucleasas
  (I-Sce I)

• TALE nucleasas

Casgevy (tm) es el primer medicamento de Edición Genómica aprobado por la FDA y EMA. Mediante la edición de un enhancer de BCL11A consigue reactivar la HbF en pacientes de Beta-Talasemia y Anemia Falciforme. pero,
¿en qué tecnología se basa?

• CRISPR-CAS9

• Zinc-Finger Nucleasas

• Prime Editors

• Vectores SV40

Cuando una nucleasa (Como CRISPR-CAS9) genera una rotura de doble hebra (DSB) en ausencia de molde reparación , ¿qué mecanismo de reparación actúa mayoritariamente en la generación de inserciones y deleciones?

• HDR
  Recombinación Homologa

• BER
  Reparación por excisión de bases

• NEHJ
  Unión de extremos sin homología

• MMDR
  Reparación por uniones con "mismatches"

Selecciona la respuesta correcta sobre las Proteinas CRISPR

• Solo Saccharomyces Cerevisiae tiene CRISPR descritas.

• Todas las variantes de CRISPR cortan DNA y usan la misma secuencia PAM

• Las principales CRISPR en cuanto apliocaciçon son CAS9 (DNA), Cas12a (DNA) y Cas13 (RNA)

• El sistema CRISPR se decubrio en bacterias pero el más usado es el systema Fanzor por ser eucariota.

¿Qué factores aumentan el riesgo genotóxico del systema CRISPR/Cas9 por actividad Off-target?

• El diseño de la guía de RNA, cuanto más específica menos of targets

• La ventana de tiempo de acción, cuanto más tiempo, más probabilidad de tener off targets.

• CRISPR-CAS9 no tiene of targets porque es casi imposible que haya dos secuencias de 20 nt iguales

• CRISPR-CAS9 siempre tiene actividad off-target debido a la actividad colateral de la SpCas9.

En el "CRISPR track" del visor de genomas de la Universidad de California Santa Cruz (UCSC) aparecen posibles guias spCas9 con puntuaciones MIT, Doench 2016, Moreno-Mateos 2015. per, ¿Qué indican?

• La cantidad de autores que ya han usado esa guia

• MIT la estimación de posibles off targets de CRISPOR en función de la secuencia de la guia.

• Doench y Moreno-Mateos, indican la eficacia de las guías testadas en líneas celulares y pez cebra respectivamente.

• Son medidas fiables de la actividad colateral de SpCas9 unida a esa guia.