Vetores - Dia 1(08/09)

No contexto da clonagem gênica, qual é a principal função de um vetor, como um plasmídeo?

• Atuar como um veículo para transportar um fragmento de DNA de interesse para dentro de uma célula hospedeira, garantindo sua replicação.

• Destruir o material genético da célula hospedeira para abrir espaço para o novo gene.

• Fornecer energia para o processo de replicação do DNA na célula hospedeira.

• Ser a fonte original do gene de interesse a ser clonado.

Qual componente de um plasmídeo de clonagem determina o número de cópias que serão mantidas dentro da célula bacteriana?

• O gene de resistência a antibióticos.

• A Origem de Replicação (ori).

• O Sítio de Múltipla Clonagem (MCS).

• O promotor.

No sistema de triagem azul-branco usado com vetores como o pUC19, a formação de uma colônia branca indica o quê?

• A bactéria não conseguiu incorporar nenhum plasmídeo.

• A bactéria incorporou um plasmídeo, mas este não contém o inserto de DNA.

• A bactéria morreu devido à toxicidade do inserto.

• A bactéria contém um plasmídeo recombinante, no qual o gene 'lacZα' foi interrompido pelo inserto de DNA.

Qual é a principal inovação do sistema de vetores de expressão pET, desenvolvido por F. William Studier?

• O uso de uma tag de fusão GST para facilitar a purificação da proteína.

• A utilização do promotor do fago T7, que é reconhecido por uma RNA polimerase específica (T7 RNA polimerase) para altíssimos níveis de expressão.

• A capacidade de se replicar tanto em bactérias quanto em células de levedura.

• A regulação da expressão através da adição de arabinose ao meio de cultura.

Os vetores pGEX foram projetados com um objetivo principal em mente, que facilitou enormemente o trabalho em bioquímica de proteínas. Qual era esse objetivo?

• Atingir os maiores níveis de expressão de proteína possíveis em E. coli.

• Manter a expressão do gene em um nível muito baixo e estritamente controlado.

• Facilitar a purificação da proteína recombinante através de uma fusão com a tag GST (Glutationa S-Transferase).

• Permitir a clonagem de genes em diferentes fases de leitura com um único vetor.

Ao ler um mapa de plasmídeo, o que uma seta associada a um gene (como o gene 'bla' para resistência à ampicilina) normalmente representa?

• O tamanho exato do gene em pares de bases.

• A localização de um sítio de restrição importante dentro do gene.

• A direção da transcrição do gene.

• A região do gene que é mais propensa a mutações