Taşıdığı herhangi bir DNA parçasını bağımsız olarak replike edebilmelidir

Klonlanacak DNA parçasının insersiyonuna olanak tanıyan tanıma dizisi içermelidir

Cos dizileri içermeliler

Seçicilik sağlayan bir marker gen bulunmalıdır.

Enzim, DNA’nın iki zincirini özgül bir kesim kalıbı oluşturacak şekilde keser.

Restriksiyon parçalarının büyüklüğü, söz konusu restriksiyon enzimlerinin DNA’yı ne kadar sıklıkla kestiğine göre hesaplanır

Tanımlanan ilk restriksiyon enzimlerinden biri E. coli’nin R suşundan izole edilmiş olan Eco RI’dir.

Restriksiyon enzimi DNA’yı yalnızca asimetrik olarak keserek tek zincirli kuyrukları olan parçalar oluşturur.

pYAC3 < pBAC < kozmit < M13 < pBR322

pBR322 < M13 < kozmit < pBAC < pYAC3

pYAC3 < pBAC < kozmit < λ < pUC18

pUC18 < pET LIC < λ < pYAC3 < pBR322

Maya ökaryotik bir organizma olmasına rağmen bakteri hücreleri gibi manipüle edilebilir (yönlendirilebilir) ve üretilebilir.

Replikatif formu bulunmaktadır

Tüm genomunun dizi analizi yapılmış ve organizmadaki genlerin çoğu belirlenmiştir.

Saf YAC DNA’sı fare yumurta hücresine mikroenjeksiyon yoluyla sokulabilmektedir.

Memeli organizmalara gen aktarmak için vektör olarak kullanılır.

Tümör oluşumu, bakterinin taşıdığı tümör-indükleyici (Ti) plazmit sayesinde olur.

Yabancı genler, T-DNA parçasının içine sokulabilir

Rekombinant Ti plazmiti taşıyan hücreler, kültür ortamında kallus (callus) olarak bilinen hücre kitlesi oluşturarak büyüyebilir.

Konak hücre olmadan DNA kopyaları yapamaz.

Birleşme (annealing) sıcaklığında Taq polimeraz tek zincirli DNA’ya bağlanır.

Nükleotitler 3’den 5’ne doğru eklenerek primerlerin uzamasını sağlar.

Farklı DNA molekülleri karışımında, yok denecek kadar az miktarda bulunan hedef DNA dizisini çoğaltabilir.

Prob, kütüphanedeki klonlanmış bir dizinin bir kısmına eşlenik (komplementer) olan ve bir şekilde işaretlenmiş DNA ya da RNA dizileridir.

Hibridizasyon reaksiyonunda kullanılan prob, bir ya da daha fazla klonda bulunan komplementer DNA dizlerine bağlanır.

Problar yalnızca tek bir kaynaklardan hazırlanabilir.

Eğer bir genomik kütüphaneden, belirli bir tip hücrede ifade olan bir gen elde edilecekse, cDNA probları kullanılabilir

Birbirinin tamamlayıcısı (komplementeri) olan nükleik asit (DNA ya da RNA) molekülleri arasındaki hibridizasyona dayanır

Nourthern blot hibridizasyonu ile belirlenen DNA, genomik DNA ya da bir kütüphaneden seçilmiş klonlar gibi çeşitli kaynaklara ait olabilir.

Western blot seçenekli sıplays (splice) sonucu oluşan mRNA’ları saptar.

DNA probuna komplementer mRNA varsa probla hibridize olacağından, film üzerinde bant şeklinde beliremez.

Dizisi belirlenecek DNA molekülü bir seri eşlenik zincirlerinin sentezlenebilmesi için önce tek zincirli hale dönüştürülür

Reaksiyonda ilk adım, DNA’nın ısıyla denatüre edilerek tek zincirli duruma getirilmesidir.

Tek zincirli DNA, 5’ ucuyla birleşecek olan primerler ile karıştırılır.

Primer bağlı tek zincirli DNA örnekleri dört ayrı tüpe pay edilir. Bir sonraki adımda, tüplere DNA polimeraz ve dört tip deoksiribonükleotit trifosfat (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) ilave edilir.