WorksheetsRT-PCR
Total questions: 10
Worksheet time: 6mins
No RT-PCR, a transcriptase reversa utiliza ...
RNA como template para formar DNA
mRNA como template para formar cDNA
DNA como template para formar ssDNA
DNA como template para formar mRNA
Para realizar um RT-PCR é necessário...
solução tampão
dNTPs
DNA polimerase
transcriptase reversa
O princípio da RT-PCR é...
Detetar e medir DNA numa amostra, convertendo-o em RNA e amplificando-o por PCR
Detetar e medir o RNA numa amostra, convertendo-o em cDNA e amplificando-o por PCR.
Detetar e medir RNA numa amostra, convertendo-o em DNA e amplificando-o por PCR
Detetar e medir proteínas numa amostra, convertendo-as em DNA e amplificando-as por PCR.
Que fatores devem ser considerados no desenho de primers para RT-PCR?
Concentração alvo, comprimento alvo, especificidade alvo, temperatura de melting (Tm) do alvo, %GC do alvo, estruturas secundárias do alvo, formação de dímero-alvo
concentração do template, comprimento do template, especificidade do template, temperatura de melting (Tm) do template, %GC do template, estruturas secundárias do template, formação de dímero-template
sequência de primers, concentração de primers, comprimento de primers, especificidade de primers, formação de dímeros de primers, temperatura de melting (Tm) de primers, %GC de primers
especificidade do alvo, comprimento do primer, temperatura de melting (Tm), %GC, estruturas secundárias, formação de dímeros de primer, concentração de primer
Delta Ct é ...
uma medida usada em PCR quantitativo (qPCR) para determinar os níveis relativos de expressão génica entre amostras
uma medida usada em PCR quantitativo (qPCR) para determinar a concentração de DNA numa amostra
uma medida usada em PCR qualitativo (qPCR) para determinar a presença ou ausência de um gene.
uma medida usada em PCR quantitativo (qPCR) para determinar os níveis absolutos de expressão génica.
O Delta Ct é calculado (a) o valor de Ct do gene alvo pelo valor de Ct do gene de referência.
Qual o significado da temperatura de melting (Tm) na curva de melting?
A temperatura de melting (Tm) é uma medida da estabilidade da dupla hélice do DNA.
A temperatura de melting (Tm) é uma medida do comprimento da sequência de DNA.
A temperatura de melting (Tm) é uma medida da taxa de replicação do DNA.
A temperatura de melting (Tm) é uma medida da concentração de DNA.
Quais destes fatores podem afetar os valores de Delta Ct?
Quantidade de RNA inicial, temperatura da reação de transcrição reversa, tipo de gene de referência, calibração do instrumento qPCR
Qualidade da amostra de RNA, eficiência da reação de transcrição reversa, escolha do gene de referência, precisão do instrumento qPCR
Todos estes fatores influenciam Delta Ct
Um Delta Ct negativo significa ...
o gene alvo não é expresso nem na amostra controlo nem na amostra experimental
o gene alvo é expresso em níveis mais elevados na amostra experimental do que na amostra controlo
o gene alvo é expresso em níveis mais reduzidos na amostra experimental do que na amostra controlo
houve um erro na escolha dos primers
O valor de Ct é calculado...
medindo a quantidade de RNA na amostra
analisando o tamanho do produto de PCR
contando o número de moléculas de DNA na amostra
determinando o número de ciclos de PCR necessários para que o sinal de fluorescência ultrapasse um limite pré-determinado
