RT-qPCR

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¿Qué es la PCR?

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La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio ampliamente utilizada para amplificar secuencias de ADN.

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¿Cuáles son los componentes de la PCR?

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1. Ácido desoxirribonucleico (ADN) 2. Nucleótidos 3. Oligonucleótidos 4. Taq Polimerasa 5. Buffer de reacción 6. Magnesio (Mg++)

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¿Cuáles son las etapas de la PCR?

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1. Desnaturalización (95 °C) 2. Alineamiento (50-65 °C) 3. Extensión (72 °C)

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¿Cuántos ciclos se realizan típicamente en la PCR?

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30-40 ciclos.

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¿Cómo se identifican los productos amplificados en PCR?

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Los fragmentos de DNA pueden ser separados por electroforesis en gel.

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¿Qué colorantes se utilizan para visualizar los fragmentos de DNA?

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Tinción con bromuro de etidio, SYBR Safe (Invitrogen) o Gel Red (Biotium).

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¿Cuáles son algunos tipos de PCR?

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1. Hot Start PCR 2. PCR con transcriptasa reversa (RT-PCR) 3. PCR anidada (Nested PCR) 4. PCR en tiempo real (RT-qPCR) 5. PCR multiplex 6. Long-range PCR 7. Fast PCR 8. GC-Rich PCR 9. Arbitrary Primed PCR

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¿Qué es RT-qPCR?

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La PCR cuantitativa (qPCR) o PCR en tiempo real (RT-qPCR) es una variante de la PCR utilizada para amplificar y cuantificar simultáneamente el producto amplificado.

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¿Qué se requiere para realizar RT-qPCR?

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Se requiere copiar el RNA mensajero a cDNA (RT) y posteriormente se lleva a cabo la amplificación por PCR.

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¿Cuáles son algunas aplicaciones de RT-qPCR?

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1. Seguimiento de cargas virales en trasplantes. 2. Estudios de expresión génica. 3. Detección de mutaciones. 4. Diagnósticos de enfermedades genéticas e infecciosas.