KONSTRUKSI PLASMID (SELEKSI TRANSFORMAN) MODUL 7

Rangkaian konstruksi plasmid diakhiri dengan ?

• Seleksi transforman hasil transformasi

• Pembersihan plasmid hasil transformasi

• Penguraian selesksi transforman

• Pengeringan supernatant setelah sentrifugasi akhir

• Perbaikan kerusakan plasmid setelah penembusan membrane

Metode seleksi transforman yang banyak digunakan ialah

• Vector Selection

• Cair-cair

• Naranjo

• Biru putih

• Hanahan

Selain metode tersebut ada juga metode digesti dengan menggunakan

• Enzim restriksi, PCR, Elektorporasi

• Enzim ligase, PCR, Elektroporasi

• Enzim ligasi, PCR, Sanger sequencing

• Enzim ligase, PCR, Vector selection

• Enzim restriksi, PCR, Sanger sequencing

Metode lain yang dapat digunakan untuk seleksi transforman yaitu metode “Seleksi Nutrisi Spesifik” Prinsip dasar dari metode ini ialah

• Plasmid rekombinan mengandung gen yang memungkinkan bakteri menggunakan sumber nutrisi tertentu dan tidak dapat digunakan oleh bakteri non transforman

• Plasmid rekombinan mengandung gen nutrisi resisten sehingga bakteri akan bisa bertahan hidup pada media yang memiliki nutrisi serupa

• Plasmid rekombinan mengandung gen yang memungkinkan bakteri musnah ketika ditempatkan pada media yang sangat bernutrisi

• Plasmid rekombinan memiliki gen yang memungkinkan dirinya menguraikan sel inang dengan nutrisi tertentu

• Plasmid rekombinan memiliki gen yang memungkinkan dirinya mampu membangkitkan bakteri yang telah mati akibat dari pemberian nutrisi tertentu

Setelah transformasi selesai, koloni diberi tanda dan dipilih lalu dilaksanakan tahapan?

• Vector selection

• Clean-up plasmid

• Penguraian DNA plasmid

• Elektroporasi

• Isolasi plasmid

Agar memastikan terdapatnya DNA insert, maka dilakukan identifikasi dengan menggunakan?

• Isolasi plasmid

• Spektrofotometer

• Vector selection

• DNA identification scanner

• Elekrtroforesis gel agarose

Plasmid rekombinan yang digunakan pada praktikum kali ini adalah plasmid?

• TAGZyme-Sub berukuran 4,5 kB

• pRSET berukuran 5,6 kB

• pBAD-Sub berukuran 4,3 kB

• pRSF berukuran 5,6 kB

• puYC-Sub berukuran 4,5 kB

Pada prosedur percobaan modul ini, tahap yang tidak dilakukan adalah?

• Tahap penumbuhan kultur transformasi

• Tahap Isolasi plasmid

• Penguraian hasil Isolasi Plasmid

• Clean-up hasil Digesti

• Eliminasi RNA polymerase

Pada prosedur hasil Restriksi melalui elektoforesis agarose apa saja komponen yang ditemapatkan pada sumur

• Marka DNA, Hasil ligasi, Plasmid yang belum direstriksi

• Marka DNA, Hasil restriksi, Plasmid yang telah diligasi

• Marka DNA, Hasil clean-up, Plasmid yang belum direstriksi

• Marka DNA, Hasil elektorforesis agarose, Plasmid yang telah diligasi

• Marka DNA, hasil restriksi, Plasmid yang belum direstriksi

Pada modul ini plasmid yang sudah diisolasi juga diketahui konsentrasinya maka sudah siap dalam proses digesti dengan enzim restriksi

• Notl dan Sall

• Pvull dan Sacll

• Notl dan Hindll

• Sacl dan Notl

• Pvull dan Sall