Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

¿Qué es la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)?

• Un método para medir la cantidad de ADN en una muestra.

• Un proceso utilizado para amplificar una secuencia específica de ADN.

• Un sistema de secuenciación de ADN.

• Una técnica para modificar la estructura de una célula.

Las técnicas de amplificación de los ácidos nucleicos emplean cantidades ________ de DNA o RNA y las replican ______ veces.

• grandes; infinidad de

• muy pequeñas: muchas

• anormales; varias

• pequeñas; 30

El primer método de amplificación específico de cualquier tipo fue la técnica de:

• Rectificación en cascada de la polimerasa

• Reacción en conjugación del polimorfismo

• Reactivación en cadena de la polimerasa

• Reacción en cadena de la polimerasa

Se han desarrollado otros métodos de amplificación basados en la realización de modificaciones a la PCR. Los métodos que se han desarrollado para amplificar ácidos nucleicos se pueden dividir en tres grupos:

• 1. 1. Amplificación del objetivo

  2. 2. Amplificación de sonda

  3. 3. Amplificación de señal

• 1. 1. Amplificación oligonucleotídica

  2. 2. Amplificación de sonda

  3. 3. Amplificación de señal

• 1. 1. Amplificación del cebador

  2. 2. Amplificación de sonda

  3. 3. Amplificación de cigüeñal

• 1. 1. Amplificación del objetivo

  2. 2. Amplificación de locus

  3. 3. Amplificación de señal

Bioquímico norteamericano que en 1983 visualizó la idea de amplificar el ADN, técnica que en la actualidad es conocida con el acrónimo de PCR.

• Karl Mulens

• Larry Muller

• Kary Mullis

• Daryl Muncis

Componente de la PCR que provee un entorno químico adecuado para la actividad de la polimerasa (pH 8-9.5).

• MgCl2

• Cebadores

• Buffer

• ADN objetivo

Componentes que sirven para generar las nuevas cadenas de ADN.

Son de cuatro tipos: dATP, dTTP, dGTP, dCTP.

• dPPN's

• dNTP's

• aNTT's

• dLLP's

Componentes de la PCR que se unen a los extremos 3’ de ambas cadenas de ADN y es importante evitar la complementariedad entre la pareja de estos.

• Celenoides

• Cofactores

• dNTP's

• Primers

Instrumento que permite realizar de forma automatizada y secuencial los ciclos de temperaturas necesarios para llevar a cabo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

• Ciclador telestático

• Espectrofotómetro

• Tensionador ciclado

• Termociclador

La PCR utiliza variaciones de temperatura para controlar el proceso de replicación mediante tres pasos:

• Desnaturalización, alineamiento y extensión

• Alineación; supinación y desnaturalización

• Desnaturalización, allanamiento y elongación

• Extensión, supinación y bipedestación