Desenvolvida em meados do século XX, a Citometria de Fluxo permite avaliar a concentração de proteínas presentes em uma amostra a nível de picogramas, a partir do uso de moléculas conjugadas com isótopos radioativos como o Iodo-125.

É baseada na interação específica e reversível entre duas moléculas em que uma destas ficará em uma fase estacionária (Fixada) e outra na fase móvel, é muito usada para a purificação de proteínas.

É uma técnica que possibilita a identificação de células quanto ao seu tamanho e complexidade interna, embora seja de custo considerável, é muito usada na pesquisa científica e na área clínica, principalmente, no setor de hematologia.

A citometria de fluxo permite avaliar a presença de anticorpos ou antígenos em uma amostra de interesse a partir de anticorpos conjugados com enzimas que emitem luminescência ao entrarem em contato com seu substrato.

Antes de iniciar, é aplicado uma solução tampão contendo agentes redutores na amostra de interesse os quais provocam a desnaturação das proteínas com o propósito de eliminar suas cargas para que corram no gel de acordo com seu peso molecular.

Na amostra a ser analisada, é feita a eletroforese principalmente em gel de Sulfato de Sódio (SDS) para a separação das proteínas de acordo com seu peso molecular.

Após a eletroforese, as proteínas separadas precisam ser passadas para uma membrana de nitrocelulose a qual servirá de base sólida para a execução das etapas de identificação da proteína de interesse.

Para identificação da proteína-alvo, são usados anticorpos monoclonais específicos além de anticorpos secundários conjugados com enzimas ou fluoróforos.

Separar os elementos da amostra em duas porções chamadas de Fração Livre, constituída de um conjunto de moléculas que não se ligaram ao anticorpo primário, e a Fração Ligada que contém o complexo antígeno-anticorpo e tem maior peso molecular.

Promover a ligação antígeno-anticorpo, quando ocorre a centrifugação, as moléculas se aproximam fazendo com que a ligação ocorra.

Separar os elementos da amostra em duas porções chamadas de Fração Livre constituída de um conjunto de moléculas que não se ligaram ao anticorpo primário e a Fração Ligada que contém o complexo antígeno-anticorpo com menor peso molecular.

Separar os elementos da amostra em duas porções chamadas de Fração Livre constituída de moléculas que não se ligaram ao anticorpo e, portanto, formam um pellet no fundo e a Fração Ligada que é o sobrenadante que contém o complexo antígeno-anticorpo.

Em geral, trata-se de um imunoensaio cujo principal objetivo é a desnaturação da proteína de interesse a qual geralmente está presente em uma mistura cheia de outras moléculas, é usado para a detecção de doenças autoimunes.

Assim como a cromatografia de imunoafinidade, a imunoprecipitação pode ser usada para a purificação de uma proteína-alvo presente em uma solução.

Corresponde a uma técnica que busca identificar uma proteína-alvo a partir da emissão de luz por quimioluminescência.

A imunoprecipitação é destinada para a produção de anticorpos monoclonais específicos.

No ELISA por competição, ocorre a relação diretamente proporcional entre a intensidade da cor e a quantidade de antígeno presente na amostra do paciente.

A curva padrão é detectada por meio da medição da densidade óptica da solução por espectrofotometria.

A técnica de ELISA indireto não deve ser usada para a detecção de anticorpos IgM em consequência da possibilidade da presença do fator reumatoide que pode levar a resultados falso-positivos.

No ELISA direto, há a relação diretamente proporcional entre a intensidade da cor e quantidade de antígeno presentes na amostra.

São colocadas entre o gel e a membrana sólida papeis filtros embebidos com solução tampão além de placas conectadas a uma fonte de energia. Quando a fonte de energia é ligada, ocorre a transferência eletroforética das proteínas.

Normalmente, as proteínas podem ser transferidas da matriz porosa do gel para a membrana de agarose por capilaridade passiva.

Para que as proteínas sejam passadas, é necessário adicionar uma solução detergente para que ocorra a transferência das proteínas para a membrana sólida por meio de interações químicas.

Diferente das técnicas de Southern e Northern Blotting que trabalham com DNA e RNA respectivamente em que a transferência de suas moléculas alvo ocorre via influência de corrente elétrica, o Western Blotting utiliza somente a transferência por capilaridade.

Diferente dos demais imunoensaios, a imunoprecipitação se baseia na não interação entre antígeno-anticorpo, por isso, quando o complexo não é formado, considera-se a amostra reagente semelhante a técnica de inibição da aglutinação.

É uma técnica pouco usada para a purificação de amostras a serem analisadas devido ao seu custo elevado, pois necessita de equipamentos específicos, além de boa infraestrutura, pois necessita de protocolos de biossegurança por lidar com material facilmente degradado.

Na imunodifusão radial (IDR), a amostra é inserida em poços perfurados em gel de agarose que contém anticorpos contra a proteína-alvo. A amostra é difundida radialmente pelo gel formando os imunoprecipitados devido ao complexo antígeno-anticorpo e esta reação pode ser quantificada pela medição dos halos.

Todas estão incorretas.

A amostra de interesse é encaminhada ao citômetro e, em seu interior, serão submetidas a influência de um sistema fluído formado por uma solução isotônica que tem por função a manutenção do fluxo das amostras.

Após a entrada da amostra de interesse, as células são encaminhadas até uma região do citômetro em que há o sistema óptico, responsável por incidir feixes de luzes sob as células que, dependendo do seu tamanho e complexidade, haverá o desvio da luz incidente.

A partir dos resultados obtidos do espalhamento frontal e dispersão lateral, pode ser construído um gráfico contendo ambas as informações chamado de Histograma.

A dispersão lateral, ou espalhamento de MIE, faz parte do sistema óptico do citômetro sendo responsável por enviar informações a respeito da complexidade ou granularidade das células presentes.

I, II e IV.

II e IV.

I, III e IV.

I, II, III e IV.