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WorksheetsPCR TIEMPO REAL
Total questions: 32
Worksheet time: 17mins
Estas trabajando en un laboraotrio y quieres realizar una PCR de productos en la misma etapa,con un rango de deteccion amplio,con mayor sensibilidad,que detecta en la fase exponencial temprana
Cual harias??
PCR convencional
PCR en tiempo reaL
Secuenciacion nanopore
Estas trabajando en un laboratorio y quieres realizar una PCR de productos en 2 etapas separadas ,con un rango de deteccion estrecho,con menor sensibilidad,que detecta en la fase exponencial y requiere equipos y reactivos de bajo costo
Cual harias??
PCR convencional
PCR en tiempo real
PCR desfasada
La siguiente imagen muestra:
PCR en tiempo real
PCR convencional
PCR ide nterfases
Entre las ventajas de la PCR en tiempo real estan:Automatizacion,Transcripcion Reversa,Disminucion del riesgo de contaminacion
Verdadero
Falso
Sone tapas de la PCR en tiempo real
Preparacion de la muestra,Transcripcion Reversa,PCR,Deteccion de fluoresencia,Cuantificacion
Preparacion de la muestra,Secuenciacion,PCR,Fluoresencia
Preparacion de la muestra,transcripcion Reversa,,PCR,Deteccion de fluoresencia,Secuenciacion
En la PCR en tiempo real de un paso la retrotranscripcion y amplificacion ocurren en tubos distintos
Verdadero
Falso
En este tipo de PCR La retrotranscripción y amplificación ocurren separadamente.
PCR en tiempo real en un paso
PCR convencional
PCR en tiempo real en dos pasos
Selecciona los que conforman el mismo intrumento en la pcr en tiempo real
Termociclador
Recolector de datos
Lector de fluorescencia
Refiriendonos a la PCR en tiempo real
"La mayoría de los equipos presentan lectores de fluorescencia que permiten leer múltiples longitudes de onda simultáneamente. Esto posibilita el desarrollo de reacciones multiplex"
Verdadero
Falso
Selecciona las correctas referente a la PCR
Replicación repetida de un segmento de ADN.
El número de secuencias de ADN va aumentando exponencialmente
Puede obtenerse un gran número de copias de ADN de una cantidad mínima de templado.
La PCR es muy novedosa y no se sabe nada
Es una molécula que absorbe radiación a una longitud de onda determinada y luego emite la energía absorbida en forma de luz a una longitud de onda diferente.
Fluoproforo
Fluoróforo
Fluorocromo
Las tecnologías fluorescentes utilizadas incluyen:
EXCEPTO
Colorantes de unión al ADN (SYBR Green).
Sondas que fluorescen luego de su hidrólisis (sondas taqman).
Sondas de hibridación.
Sondas fluorescentes pegadas.
Sondas Masters
Imagina que estas en un laboratorio y quires realizar una PCR en tiempo real por medio de una tencologia fluorescente para la deteccion de productos INESPECIFICOS, y es el fluoroforo especifico de DNA bicatenario mas usado.
Colorante de union al ADN (SYBR Green)
Sondas de hibridación específicas
Sondas de hidrólisis
En este tipo de tecnologicas de fluroesencia El proceso se basa en la transferencia de energía fluorescente mediante resonancia (FRET) las dos moléculas.Las sondas marcadas un donador y un aceptor de fluorescencia.
SYBER GREEN
Sondas de hibridación específica
Sondas de hidrolisis
En este tipo e tecnologia de Fluorescencia mientras la sonda este intacta no emite fluorescencia.
• Una vez unida e hidrolizada, fluoresce.
Oligonucleótidos marcados.
• Fluoroforo y un quécher •
Sondras de hibridacion especificas
Sondas de Hidrolisis
Sondas fluorescentes pegadas
SYBR Green
En este tipo de tecnologias de fluoresencia en PCR en tiempo real
Oligonucleótidos marcados.
• Fluoroforo y un quécher
• Mientras la sonda este intacta no emite fluorescencia.
• Una vez unida e hidrolizada, fluoresce.
• Tienen una estructura secundaria
Colorantes de unión al ADN (SYBR Green).
Sondas que fluorescen luego de su hidrólisis (sondas taqman).
Sondas de hibridación.
Molecular beicons
Es la definicion de:
Es el número de ciclos en el que la señal fluorescente cruza este umbral.En la fase exponencial temprana, la intensidad de fluorescencia alcanza un umbral que es significativamente mayor que la la fluorescencia de fondo. El ciclo en que esto ocurre se denomina Ct (threshold cycle)
Ciclo repetitivo
Ciclo umbral.
Ciclo PCR
En una PCR A mayor producto de amplificación mayor fluorescencia!!!!
VERDADERO SIII
NO GRRR
Es la cantidad mínima de señal que ha de estar presente para ser registrada por un sistema
reactivo
umbral
inciiador
el número de ciclos necesarios para interceptar el valor umbral se llama “ciclo umbral” o “threshold cycle”
Cb
Ct
Cl
Cf
Expresión del nivel de fluorescencia
Significado de:Rn
magnitud de fluorescencia generada durante la PCR.
intensidad de la señal emitida por el reporter
umbral en el que se produce un cambio significativo en la fluorescencia
ciclos iniciales de la PCR (3-15) en los cuales hay cambios mínimos en la emisión de fluorescencia.
Expresión del nivel de fluorescencia
Significado de:ΔRn
ciclos iniciales de la PCR (3-15) en los cuales hay cambios mínimos en la emisión de fluorescencia.
: intensidad de la señal emitida por el reporter
umbral en el que se produce un cambio significativo en la fluorescencia.
magnitud de fluorescencia generada durante la PCR.
Expresión del nivel de fluorescencia
Significado de:Threshold
número de ciclo en el cual la fluorescencia emitida supera el threshold. Está inversamente correlacionado con el log. del núm. inicial de copias.
umbral en el que se produce un cambio significativo en la fluorescencia.
ciclos iniciales de la PCR (3-15) en los cuales hay cambios mínimos en la emisión de fluorescencia.
Expresión del nivel de fluorescencia
Significado de Basal:
intensidad de la señal emitida por el reporter
Ciclos iniciales de la PCR (3-15) en los cuales hay cambios mínimos en la emisión de fluorescencia.
Umbral en el que se produce un cambio significativo en la fluorescencia.
Expresión del nivel de fluorescencia
Significado de:Ct
ciclos iniciales de la PCR (3-15) en los cuales hay cambios mínimos en la emisión de fluorescencia.
Número de ciclo en el cual la fluorescencia emitida supera el threshold. Está inversamente correlacionado con el log. del núm. inicial de copias
umbral en el que se produce un cambio significativo en la fluorescencia.
¿Que fase es la que señala el circulo rosa?
Fase exponencial temprana
Fase Linear
Fase Meseta
Fase exponencial
¿Que fase es la que señala el circulo rosa?
Fase Linear
Fase Exponencial Temprana
Fase Exponencial
Fase Meseta
¿Que fase es la que señala el circulo rosa?
Fase exponencial
Fase exponencial temprana
Fase Lienar
Fase meseta
valor numérico que representa en qué ciclo de PCR se cruza por primera vez el umbral. Indica cuántos ciclos de amplificación se necesitaron para que la señal de fluorescencia superara el umbral. Este valor se usa para cuantificar la cantidad de material genético presente en la muestra inicial.
Linea o señal Base
CT
Fase Exponencial
Valor específico que se define como la cantidad mínima de señal de fluorescencia que se considera significativa.
Fase exponencial
Umbral
Línea o señal base:
Ct
Es el punto en la curva de PCR donde la amplificación alcanza su punto máximo. Significa que se ha alcanzado una cantidad máxima de producto de PCR. A partir de este punto, la señal ya no aumenta de manera significativa. La fase meseta es esencial para determinar si ha habido una amplificación eficiente y si los reactivos y condiciones de la PCR funcionaron correctamente
Fase exponencial
Fase meseta
Ct
Línea o señal base
Esta es la etapa de la PCR en tiempo real donde la amplificación del ADN se produce de manera exponencial. En esta fase, la cantidad de material genético se duplica en cada ciclo, lo que lleva a un rápido aumento de la señal de fluorescencia. Es la parte más importante de la PCR en tiempo real, ya que permite cuantificar la cantidad inicial de material genético en la muestra.
Fase Linear
Fase Exponencial
Fase exponencial temprana
Fase meseta
