Wayground logo

Free Printable Worksheets

Font size

S
M
L
XL
Worksheets

Western Blot

Total questions: 10

Worksheet time: 41mins

Name
Class
Date
1.

Na czym opiera się mechanizm działania metody Western blot?

a)

Reakcji kwasowo-zasadowej

b)

Reakcji oksydoredukcyjnej

c)

Reakcji enzym-substrat

d)

Reakcji antygen-przeciwciało

2.

Co umożliwia rozdział białek ze względu na ich masę cząsteczkową w metodzie SDS-PAGE?

a)

Żelatyna

b)

SDS

c)

Tween20

d)

Albumina surowicy krwi bydlęcej

3.

W jaki sposób można zablokować miejsca niespecyficznego wiązania na membranie w metodzie Western blot?

a)

Żelatyna

b)

Tween20

c)

Albumina surowicy krwi bydlęcej

d)

Mleko w proszku z dodatkiem detergentu

4.

Co umożliwia elektroforeza SDS-PAGE w metodzie Western blot?

a)

Rozdział białek ze względu na ich kształt

b)

Rozdział białek ze względu na ich masę cząsteczkową

c)

Rozdział białek ze względu na ich ładunek

d)

Rozdział białek ze względu na ich strukturę trzeciorzędową

5.

Jakie białka migrują szybciej podczas elektroforezy SDS-PAGE?

a)

Białka o mniejszej masie cząsteczkowej

b)

Białka o mniejszym ładunku

c)

Białka o większym ładunku

d)

Białka o większej masie cząsteczkowej

6.

Jakie białka migrują w stronę anody podczas elektroforezy w metodzie Western blot?

a)

Białka o zmiennym ładunku

b)

Białka o neutralnym ładunku

c)

Białka o ujemnym ładunku

d)

Białka o dodatnim ładunku

7.

  1. WB- to technika biologii molekularnej służąca do wykrywania i określania poziomu białek. Technika opiera się na denaturującym rozdziale w żelu poliakrylamidowym mieszaniny białek wyizolowanych z badanego materiału.Po przeprowadzeniu rozdziału w żelu, pod wpływem pola elektrycznego (tzw. transfer) białka są przenoszone na membrany nitrocelulozowe lub PVDF. Detekcja wybranych białek odbywa się z jedno- lub dwustopniowo z wykorzystaniem specyficznych przeciwciał skierowanych przeciwko badanemu białku.

  2. Ponceau S jest barwnikiem stosowanym do wykrywania białek na membranach nitrocelulozowych oraz wykonanych z octanu celulozy w metodzie Western blot.

7.

Bazując na podanych informacjach oraz wiedzy własnej wyjaśnij, w którym momencie analizy białek metodą WB stosuje się barwienie Ponceau S oraz w jakim celu jest ten etap?

4 lines
8.

[Western Blot] Podczas elektroforezy białka o mniejszej masie cząsteczkowej migrują szybciej niż te o większej masie cząsteczkowej. Rozdział prowadzony jest w żelu składającym się z dwóch części – żelu rozdzielającego (znajdującego się na dole) oraz żelu zagęszczającego (położonego na górze), różnią się one gęstością i wartością pH. Białka o niskiej masie cząsteczkowej zawieszone w buforze o niskim przewodnictwie ulegają skondensowaniu na granicy z żelem zagęszczającym. Koncentracja wynika z obustronnego kontaktu z buforami o wysokim przewodnictwie (buforu elektrodowego i buforu w żelu zagęszczającym). Dzięki takiemu umiejscowieniu możliwy jest efektywny rozdział w części rozdzielającej żelu.

8.

Na podstawie przedstawionego fragmentu tekstu, a także wiedzy własnej, wymień trzy najważniejsze składniki żelu, który przygotujesz w metodzie Western Blot.

4 lines
9.

Wybierz odpowiedź przedstawiającą prawidłową kolejność etapów metody WB (opris skrócony):

  1. 1. Rozdział elektroforetyczny

  2. 2. znakowanie p-ciałem Irz

  3. 3. dodanie substratu

  4. 4. znakowanie p-ciałem IIrz

  5. 5. transfer na membranę

a)

1,2,3,4,5

b)

1,2,4,3,5

c)

1,5,2,4,3

d)

3,1,2,4,5

10.

Jednym z etapów metody WB jest tzw "blokowanie", do którego używa się np. roztworu mleka w proszku. Celem blokowania jest zapobieganie niespecyficznym sygnałom, które mogą fałszować wynik końcowy testu. Posiadając tą wiedzę wybierz etap po którym następuje blokowanie.

a)

Po rozdziale elektroforetycznym

b)

Po transferze na membranę

c)

Po nałożeniu przeciwciał I rzędowych

d)

Po dodaniu enzymu