WorksheetsWestern Blot
Total questions: 10
Worksheet time: 41mins
Na czym opiera się mechanizm działania metody Western blot?
Reakcji kwasowo-zasadowej
Reakcji oksydoredukcyjnej
Reakcji enzym-substrat
Reakcji antygen-przeciwciało
Co umożliwia rozdział białek ze względu na ich masę cząsteczkową w metodzie SDS-PAGE?
Żelatyna
SDS
Tween20
Albumina surowicy krwi bydlęcej
W jaki sposób można zablokować miejsca niespecyficznego wiązania na membranie w metodzie Western blot?
Żelatyna
Tween20
Albumina surowicy krwi bydlęcej
Mleko w proszku z dodatkiem detergentu
Co umożliwia elektroforeza SDS-PAGE w metodzie Western blot?
Rozdział białek ze względu na ich kształt
Rozdział białek ze względu na ich masę cząsteczkową
Rozdział białek ze względu na ich ładunek
Rozdział białek ze względu na ich strukturę trzeciorzędową
Jakie białka migrują szybciej podczas elektroforezy SDS-PAGE?
Białka o mniejszej masie cząsteczkowej
Białka o mniejszym ładunku
Białka o większym ładunku
Białka o większej masie cząsteczkowej
Jakie białka migrują w stronę anody podczas elektroforezy w metodzie Western blot?
Białka o zmiennym ładunku
Białka o neutralnym ładunku
Białka o ujemnym ładunku
Białka o dodatnim ładunku
WB- to technika biologii molekularnej służąca do wykrywania i określania poziomu białek. Technika opiera się na denaturującym rozdziale w żelu poliakrylamidowym mieszaniny białek wyizolowanych z badanego materiału.Po przeprowadzeniu rozdziału w żelu, pod wpływem pola elektrycznego (tzw. transfer) białka są przenoszone na membrany nitrocelulozowe lub PVDF. Detekcja wybranych białek odbywa się z jedno- lub dwustopniowo z wykorzystaniem specyficznych przeciwciał skierowanych przeciwko badanemu białku.
Ponceau S jest barwnikiem stosowanym do wykrywania białek na membranach nitrocelulozowych oraz wykonanych z octanu celulozy w metodzie Western blot.
Bazując na podanych informacjach oraz wiedzy własnej wyjaśnij, w którym momencie analizy białek metodą WB stosuje się barwienie Ponceau S oraz w jakim celu jest ten etap?
[Western Blot] Podczas elektroforezy białka o mniejszej masie cząsteczkowej migrują szybciej niż te o większej masie cząsteczkowej. Rozdział prowadzony jest w żelu składającym się z dwóch części – żelu rozdzielającego (znajdującego się na dole) oraz żelu zagęszczającego (położonego na górze), różnią się one gęstością i wartością pH. Białka o niskiej masie cząsteczkowej zawieszone w buforze o niskim przewodnictwie ulegają skondensowaniu na granicy z żelem zagęszczającym. Koncentracja wynika z obustronnego kontaktu z buforami o wysokim przewodnictwie (buforu elektrodowego i buforu w żelu zagęszczającym). Dzięki takiemu umiejscowieniu możliwy jest efektywny rozdział w części rozdzielającej żelu.
Na podstawie przedstawionego fragmentu tekstu, a także wiedzy własnej, wymień trzy najważniejsze składniki żelu, który przygotujesz w metodzie Western Blot.
Wybierz odpowiedź przedstawiającą prawidłową kolejność etapów metody WB (opris skrócony):
1. Rozdział elektroforetyczny
2. znakowanie p-ciałem Irz
3. dodanie substratu
4. znakowanie p-ciałem IIrz
5. transfer na membranę
1,2,3,4,5
1,2,4,3,5
1,5,2,4,3
3,1,2,4,5
Jednym z etapów metody WB jest tzw "blokowanie", do którego używa się np. roztworu mleka w proszku. Celem blokowania jest zapobieganie niespecyficznym sygnałom, które mogą fałszować wynik końcowy testu. Posiadając tą wiedzę wybierz etap po którym następuje blokowanie.
Po rozdziale elektroforetycznym
Po transferze na membranę
Po nałożeniu przeciwciał I rzędowych
Po dodaniu enzymu
