WorksheetsTema 20. Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
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¿Cuál fue el descubrimiento clave de Watson y Crick en el estudio de los ácidos nucleicos?
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
La estructura del ADN (ácido desoxirribonucleico).
La enzima transcriptasa reversa.
La polimerasa Taq.
¿Qué tecnología revolucionó la biología molecular en 1983?
La polimerasa Taq.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
La transcriptasa reversa.
La estructura del ARN.
¿Qué enzima es capaz de sintetizar ADN de manera natural en las células?
La polimerasa Taq.
La enzima ADN polimerasa.
La transcriptasa reversa.
La polimerasa Pfu.
¿Qué tipo de ADN se utiliza en la técnica RT-PCR?
ADN genómico.
ADN complementario (ADNc).
ARN viral.
ADN mitocondrial.
¿Qué microorganismo se utiliza para obtener la polimerasa Taq?
Pyrococcus furiosus.
Thermus aquaticus.
Escherichia coli.
Bacillus subtilis.
¿Cuál es la función de la enzima transcriptasa reversa en la reacción RT-PCR?
Sintetizar ADN genómico.
Convertir ARN en ADN.
Amplificar ADN complementario.
Corregir errores en la replicación.
¿Qué polimerasa es conocida por su capacidad de corrección de errores?
La polimerasa Taq.
La polimerasa Pfu.
La enzima ADN polimerasa.
La transcriptasa reversa.
¿Cuáles son las tres etapas principales de la reacción de PCR?
Desnaturalización, hibridación y extensión
Transcripción, traducción y replicación
Desnaturalización, elongación y transcripción
Hibridación, replicación y transcripción
¿Qué elemento principal en la PCR actúa como molde para sintetizar nuevas cadenas de ADN?
Enzima
ADN
dNTPs
Buffer
¿Qué característica distingue a la enzima Taq ADN polimerasa de otras ADN polimerasas?
Su capacidad para funcionar en condiciones de baja temperatura
Su capacidad para mantener funcionalidad a temperaturas altas
Su capacidad para sintetizar proteínas
Su capacidad para desnaturalizar ADN
¿Qué sucede si los primers no cumplen con las reglas de tamaño y cantidad de G-C?
Se forma ADN polimerasa defectuosa
Se forman dímeros de primers
Se detiene la reacción de PCR
Se produce una doble hélice inestable
¿Qué función tiene el ion magnesio (Mg+) en la reacción de PCR?
Actúa como molde para la síntesis de ADN
Proporciona estabilidad a la doble hélice
Facilita la interacción entre los elementos de la reacción
Cataliza la formación de dímeros
¿Cuál es la dirección en la que las cadenas de ADN son extendidas por la Taq polimerasa durante la PCR?
Dirección 3'-5'
Dirección 5'-3'
Dirección 2'-4'
Dirección 4'-2'
¿Qué concentración de dNTPs se utiliza normalmente en una reacción de PCR?
Entre 0.2 y 1.0 mM
Entre 1.5 y 2.5 mM
Entre 0.5 y 2.0 mM
Entre 2.0 y 3.0 mM
¿Cuál es el pH del buffer Tris-HCl utilizado en la reacción de PCR?
pH = 6
pH = 7
pH = 8
pH = 9
¿Qué función cumple el magnesio en la reacción de PCR?
Actúa como disolvente.
Influye en la especificidad de la reacción.
Proporciona energía a la reacción.
Actúa como inhibidor de la polimerasa.
¿Cuál es el volumen típico de la mezcla de PCR en los tubos de reacción?
100 microlitros
200 microlitros
300 microlitros
500 microlitros
¿Qué etapa es necesaria antes de realizar la reacción de PCR?
Purificación de proteínas.
Extracción de los ácidos nucleicos.
Análisis de espectros.
Síntesis de ARN.
¿Por qué es importante la calidad y pureza de los ácidos nucleicos en la PCR?
Para evitar la degradación de las proteínas.
Para garantizar resultados específicos y confiables.
Para aumentar la velocidad de la reacción.
Para reducir el costo de los reactivos.
¿Cuáles son las dos fases principales en el proceso de extracción de ácidos nucleicos?
Purificación y centrifugación.
Extracción y purificación.
Lisis y concentración.
Disgregación mecánica y eliminación de parafina.
¿Qué tipo de ácido nucleico puede ser el objetivo en una muestra?
Solo ADN genómico.
ARN genómico o ADN genómico.
Solo ARN de patógenos.
ADN mitocondrial exclusivamente.
¿Qué tratamiento previo se utiliza para eliminar los hematíes en muestras de sangre?
Centrifugación en gradiente de densidad.
Lisis con tampón hipotónico y lavado con tampón isotónico.
Disgregación mecánica.
Extracción con disolvente orgánico.
¿Qué técnica se utiliza para concentrar células mononucleares de sangre periférica?
Disgregación mecánica.
Centrifugación en gradiente de densidad.
Ultracentrifugación.
Extracción directa por calor.
¿Qué tipo de extracción se recomienda para muestras no complejas y ricas en ácido nucleico?
Extracción directa por calor.
Extracción con tratamiento enzimático.
Centrifugación en gradiente de densidad.
Eliminación de parafina con disolvente orgánico.
¿Qué se utiliza en la extracción con tratamiento enzimático para muestras con micobacterias o bacterias gram positivas?
Disolventes orgánicos.
Proteasas o lisozima.
Tampón isotónico.
Centrifugación en gradiente de densidad.
¿Cuál es el propósito principal de la extracción orgánica en el proceso de separación de ácidos nucleicos?
Separar proteínas y lípidos de la fase acuosa.
Estabilizar el pH y proteger el ADN de la degradación.
Precipitar y concentrar los ácidos nucleicos.
Eliminar sustancias inhibidoras de la PCR.
¿Qué sustancia se utiliza comúnmente en la digestión para romper membranas y solubilizar lípidos?
Alcohol isopropílico.
Detergente SDS.
Sales NaCl.
Fenol.
¿Cuál es una desventaja del protocolo de extracción orgánica?
Es rápido y eficiente.
Utiliza compuestos tóxicos y requiere mucha manipulación.
No permite la separación de fases.
No estabiliza el pH.
¿Qué método de extracción utiliza bolitas metálicas cubiertas de sílica para atraer ácidos nucleicos?
Extracción orgánica.
Extracción inorgánica.
Extracción magnética.
Extracción con reactivos específicos.
¿Qué función tienen las membranas con reactivos específicos en los sistemas de extracción de ADN?
Realizar la lisis celular y conservar los ácidos nucleicos.
Precipitar los ácidos nucleicos con alcohol.
Estabilizar la interfase y eliminar lípidos.
Desnaturalizar proteínas y lípidos.
¿Cuál es una medida para disminuir el riesgo de contaminación en las reacciones de PCR?
Usar reactivos sin esterilizar.
Realizar la extracción y preparación en áreas separadas.
Evitar la limpieza de superficies.
No utilizar tratamiento con UV.
¿Qué temperatura se utiliza en la etapa de "inicio" de la PCR cuando se emplea una polimerasa termoestable extrema?
70-80 °C.
94-96 °C.
50-60 °C.
100-110 °C.
¿Cuál es el propósito de la etapa de desnaturalización en el ciclo de PCR?
Activar la polimerasa por calor.
Separar las hebras de ADN.
Duplicar el ADN monocatenario.
Enrollar el ADN bicatenario.
¿Qué tipo de medidas de bioseguridad se deben aplicar al usar PCR para el diagnóstico de microorganismos patógenos?
Solo proteger a los trabajadores.
Proteger a los trabajadores y al medio ambiente.
Evitar la evaluación de riesgos.
Usar reactivos sin esterilizar.
¿Cuál es la temperatura óptima para la etapa de hibridación o alineamiento (annealing) en el proceso de PCR?
50-60 °C
70-74 °C
30-40 °C
80-90 °C
¿Qué enzima es responsable de la extensión o elongación de la cadena en el proceso de PCR?
ARN polimerasa
ADN polimerasa
Ligasa
Helicasa
¿Cuál es la dirección en la que la ADN polimerasa sintetiza la nueva hebra de ADN?
3' → 5'
5' → 3'
2' → 4'
1' → 3'
¿Qué temperatura se utiliza comúnmente para la etapa de extensión en el proceso de PCR?
72 °C
50 °C
90 °C
60 °C
¿Cuál es el propósito de la etapa de elongación final en el proceso de PCR?
Separar las cadenas de ADN
Asegurar que cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente amplificado
Hibridar los cebadores con la cadena molde
Reducir la temperatura del ADN amplificado
¿Cuál es el número aproximado de ciclos que suelen tener las reacciones de PCR?
Entre 10 y 20 ciclos
Entre 20 y 30 ciclos
Entre 35 y 45 ciclos
Entre 50 y 60 ciclos
¿Qué ocurre con la cantidad de fragmento de ADN molde al final de cada ciclo de PCR?
Se reduce a la mitad
Se duplica
Permanece constante
Se elimina
¿Cómo afecta una temperatura elevada en la fase de hibridación a la especificidad de la reacción de PCR?
Aumenta la especificidad
Disminuye la especificidad
No afecta la especificidad
Detiene la reacción
¿Qué papel desempeñan los iones divalentes, como el MgCl₂, en la reacción de PCR?
Facilitan la unión del cebador a la cadena molde
Inhiben la reacción de PCR
Reducen la cantidad de ADN molde
Aumentan la temperatura de la reacción
¿Cuál es el producto final de la reacción de PCR después de 20 ciclos?
Una cantidad igual al ADN molde inicial
Una cantidad multiplicada por más de un millón respecto al ADN molde inicial
Una cantidad reducida a la mitad respecto al ADN molde inicial
Una cantidad constante durante todos los ciclos
¿Cuál es la temperatura recomendada para conservar la reacción en el paso de conservación de PCR?
20-25 °C
4-15 °C
30-40 °C
50-60 °C
¿Qué sucede con los "productos cortos" después del segundo ciclo de amplificación?
Se descomponen rápidamente
Se convierten en el producto predominante
Se eliminan del proceso
Se combinan con los primers
¿Qué tipo de marcador molecular se utiliza para identificar los amplicones en la PCR convencional?
Marcador de peso molecular
Marcador de fluorescencia
Marcador de temperatura
Marcador de longitud de onda
¿Qué técnica se utiliza para visualizar los productos de amplificación en la PCR convencional?
Microscopía electrónica
Electroforesis en geles de agarosa
Cromatografía líquida
Espectroscopía de masas
¿Qué sustancia se utiliza para teñir los productos de amplificación en la PCR convencional?
Syber Green
Azul de metileno
Bromuro de etidio
Fluoresceína
¿Qué técnica se utiliza para amplificar la región de interés en la secuenciación de ácidos nucleicos?
Electroforesis en gel
PCR convencional
Secuenciación directa
Microscopía electrónica
¿Cuál es el propósito de los controles de extracción positivos (CE+)?
Verificar la ausencia de contaminación en el proceso de maceración
Detectar e identificar microorganismos o parásitos en muestras positivas
Utilizar agua para PCR como control negativo
Preparar muestras dopadas para evitar resultados falsos negativos
¿Qué tipo de control se utiliza para verificar la ausencia de contaminación en el proceso de maceración de muestras sólidas?
Control de amplificación positivo (CA+)
Control de maceración negativo (CM-)
Control dopado (Cdop)
Control de extracción negativo (CE-)
¿Qué se utiliza como control de amplificación negativo (CA-)?
PBS estéril
Agua para PCR
Extracto de ácidos nucleicos
Suspensiones víricas
¿Cuál es el propósito del control dopado (Cdop) en la técnica de PCR?
Detectar microorganismos en muestras positivas
Verificar la ausencia de contaminación en el proceso de maceración
Evitar resultados falsos negativos debido a posibles inhibidores de la PCR
Utilizar agua para PCR como control negativo
¿Qué se utiliza en la PCR anidada para realizar una segunda amplificación?
Cebadores externos
Cebadores internos
Control interno de PCR
Matriz de ADN
¿Cuál es una ventaja de la PCR multiplex?
Amplifica un solo segmento de ADN
Utiliza una gran cantidad de reactivos
Detecta múltiples agentes infecciosos simultáneamente
Requiere condiciones muy específicas para la amplificación
¿Qué tipo de control se puede utilizar en la PCR para detectar inhibiciones?
Control interno de PCR
Control externo de PCR
Control de amplificación
Control de sensibilidad
¿Qué se compara en las pruebas de PCR anidada con las pruebas de PCR simple?
La cantidad de ADN amplificado
La sensibilidad y especificidad analíticas
El número de cebadores utilizados
La cantidad de reactivos empleados
¿Qué se amplifica en la PCR multiplex?
Un solo fragmento de ADN
Múltiples secuencias en una misma reacción
Una secuencia específica del genoma diana
Un control endógeno
¿Qué tipo de preparación se utiliza en la técnica de PCR in situ?
Preparaciones líquidas en tubos de ensayo
Preparaciones fijas sobre un portaobjetos
Preparaciones en placas de Petri
Preparaciones en gel de agarosa
¿Qué enzima es necesaria para realizar la RT-PCR?
Polimerasa de ADN
Transcriptasa inversa
Ligasa
Nucleasa
¿Qué mide la PCR digital (dPCR) en comparación con la PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)?
La cantidad de ADN en una muestra
La fracción de réplicas negativas para determinar copias absolutas
La velocidad de amplificación del ADN
La cantidad de ARN en una muestra
¿Qué algoritmo estadístico se utiliza en la dPCR para ajustar la fracción de reacciones negativas?
Algoritmo de Bayes
Algoritmo de Poisson
Algoritmo de Monte Carlo
Algoritmo de Gauss
¿Qué tipo de sondas se utilizan en el ensayo TaqMan® en la PCR digital?
Sondas marcadas con moléculas fluorescentes
Sondas marcadas con enzimas
Sondas marcadas con proteínas
Sondas marcadas con lípidos
¿Cuál es una ventaja de la PCR digital?
Requiere referencias o estándares.
Tiene baja tolerancia a los inhibidores.
Permite analizar mezclas complejas.
No detecta pequeños cambios de plegado.
¿Qué modelo se utiliza para aplicar un factor de corrección en la PCR digital?
Modelo de Mendel.
Modelo de Poisson.
Modelo de Newton.
Modelo de Darwin.
¿Qué técnica de PCR se basa en la hibridación de productos de PCR a sondas de oligonucleótidos específicos de alelos?
ARMS-PCR.
PCR digital.
ASO-PCR.
PCR estándar.
¿Qué ocurre en la ARMS-PCR cuando no existe complementariedad entre el nucleótido terminal 3’ de un primer y el molde?
La amplificación es eficiente.
La amplificación no ocurre.
Se amplifica el alelo mutado.
Se amplifica el alelo normal.
Diagrama que muestra la relación de reacciones de PCR positivas (negro) a negativas (blanco) para contar el número de moléculas objetivo.
Diagrama de dilución límite (digital PCR)
Diagrama de electroforesis en gel
Diagrama de espectrometría de masas
Diagrama de secuenciación Sanger
¿Cuál es la principal ventaja de la PCR en tiempo real en comparación con la PCR punto final?
Permite detectar productos amplificados al final de la reacción.
Monitorea la reacción en tiempo real sin necesidad de manipulación adicional.
Utiliza gel de agarosa para confirmar el éxito de la reacción.
No requiere el uso de fluorocromos.
¿Qué función tienen los "reporteros fluorescentes" en la PCR en tiempo real?
Generar señales eléctricas durante la reacción.
Detectar productos amplificados mediante fluorescencia.
Aumentar la velocidad de la reacción.
Reducir la cantidad de ADN necesario para la amplificación.
¿Cuál es el principal inconveniente del uso de SYBR Green en la PCR en tiempo real?
Es un colorante costoso.
Puede unirse a cualquier molécula de ADN de doble cadena, incluyendo dímeros de primers.
No emite fluorescencia en presencia de ADN.
Requiere condiciones específicas de temperatura para funcionar.
¿Qué tipo de moléculas se utilizan en los métodos no específicos de detección en la PCR en tiempo real?
Moléculas intercalantes con afinidad por el ADN de doble cadena.
Enzimas que degradan el ADN.
Proteínas que bloquean la amplificación.
Colorantes que no emiten fluorescencia.
¿Qué ocurre cuando SYBR Green se une al surco menor del ADN de doble cadena?
Disminuye la fluorescencia emitida.
Incrementa la fluorescencia hasta 1,000 veces.
Bloquea la amplificación del ADN.
Genera señales eléctricas en lugar de fluorescencia.
¿Cuál es una ventaja del uso del colorante SYBR Green en la amplificación de ADN bicatenario?
Reduce los costos de ejecución y configuración de los ensayos.
Genera señales de falsos positivos.
Requiere sondas específicas para su funcionamiento.
No puede controlar la amplificación de secuencias de ADN.
¿Cuál es la principal desventaja del colorante SYBR Green?
No puede intercalarse en el ADN bicatenario.
Genera señales de falsos positivos al unirse a secuencias de ADN inespecíficas.
Requiere sondas específicas para su funcionamiento.
No puede ser utilizado en ensayos de hibridación.
¿Qué principio sigue el método específico basado en fluorescencia para detectar productos amplificados?
Transferencia de energía de resonancia fluorescente (FRET).
Amplificación de ADN inespecífico.
Intercalación de colorantes en ADN monocatenario.
Uso de sondas no fluorescentes.
¿Qué ocurre cuando una sonda fluorescente hibrida con su secuencia blanco en los métodos específicos?
La actividad exonucleasa de la Taq polimerasa rompe la unión, liberando fluorescencia.
La sonda permanece unida sin generar fluorescencia.
La fluorescencia es absorbida por el ADN monocatenario.
No se produce ningún cambio conformacional.
¿Qué son las sondas Taqman y cómo funcionan en las PCR en tiempo real?
Son cadenas cortas de ácidos nucleicos marcadas con un fluorocromo que emite fluorescencia al ser excitado.
Son proteínas que amplifican el ADN sin necesidad de marcadores fluorescentes.
Son enzimas que cortan el ADN en fragmentos específicos.
Son moléculas que inhiben la amplificación del ADN.
¿Qué ocurre si en una muestra de PCR en tiempo real con sondas Taqman no hay presencia de ácido nucleico diana?
Se produce un aumento notable de fluorescencia.
No se produce un aumento notable de fluorescencia.
La polimerasa amplifica el ADN sin marcadores.
El termociclador detecta altos niveles de fluorescencia.
¿Cuál es la función del fluorocromo donador en las sondas Taqman?
Emitir fluorescencia al ser excitado y transferirla al aceptador cercano.
Inhibir la amplificación del ADN.
Cortar el ADN en fragmentos específicos.
Detectar la presencia de proteínas en la muestra.
¿Qué característica principal tienen las sondas molecular Beacons que les permite emitir fluorescencia al hibridarse con el ADN diana?
La presencia de un grupo donador en el extremo 3'.
La estructura secundaria que mantiene los extremos plegados.
La capacidad de absorber fluorescencia del equipo.
La emisión de fluorescencia sin necesidad de hibridación.
¿Qué sucede con las sondas Scorpions durante la PCR cuando el primer elonga?
La sonda se mantiene plegada y no emite fluorescencia.
La sonda hibrida con su secuencia complementaria y emite fluorescencia.
La sonda se desactiva y no amplifica el ADN.
La sonda se separa del ADN diana y absorbe fluorescencia.
¿Cómo funcionan las sondas FRET para detectar fluorescencia?
Emiten fluorescencia directamente al unirse al ADN diana.
Transfieren energía del donador al aceptor, que emite fluorescencia.
Absorben fluorescencia del equipo y la reflejan.
Se separan del ADN diana y emiten fluorescencia.
¿Cuál es una ventaja de las sondas FRET en comparación con otros métodos?
Permiten la amplificación de dos secuencias diferentes en un solo tubo de reacción.
Requieren procesamiento posterior a la PCR.
Necesitan la síntesis de sondas diferentes para secuencias diferentes.
No generan señales fluorescentes específicas.
¿Cuál es la principal desventaja de la composición química TaqMan?
Requiere una hibridación específica entre la sonda y el objetivo.
Necesita la síntesis de sondas diferentes para secuencias diferentes.
Reduce los costes de material y mano de obra.
No utiliza tecnología de fluorescencia.
¿Qué pasos son necesarios para capturar la señal de fluorescencia en un termociclador de PCR en tiempo real?
Excitar el reportero, capturar la señal de emisión y realizar el análisis cuantitativo.
Excitar el reportero y realizar el análisis cualitativo.
Capturar la señal de emisión y realizar el análisis cualitativo.
Excitar el reportero y capturar la señal de emisión únicamente.
¿Cuáles son las fuentes de energía utilizadas en los termocicladores de PCR en tiempo real?
Lámparas de luz, diodos de emisión de luz (LED) y láseres.
Lámparas de luz, diodos de emisión de luz (LED) y reactores químicos.
Lámparas de luz, láseres y reactores químicos.
Diodos de emisión de luz (LED), reactores químicos y láseres.
¿Qué mide la fluorescencia dentro del tubo de reacción en la PCR en tiempo real?
La cantidad de ADN amplificado.
La temperatura del termociclador.
La longitud de onda del láser.
La cantidad de reactivos utilizados.
¿Qué tipo de gráfica muestra el curso y progreso de la reacción en la PCR en tiempo real?
Gráfica de amplificación.
Gráfica de temperatura.
Gráfica de reactivos.
Gráfica de longitud de onda.
¿Qué información proporciona la curva de disociación o curva melting en la PCR en tiempo real?
La especificidad de la reacción.
La cantidad de reactivos utilizados.
La velocidad de amplificación.
La temperatura del termociclador.
¿Qué representa la línea base en una curva de amplificación de PCR en tiempo real cualitativa?
El punto donde la fluorescencia alcanza su máximo.
La señal de fluorescencia en las muestras negativas y en los primeros ciclos de amplificación.
El umbral de fluorescencia fijado ligeramente por encima de la línea base.
El valor de Ct donde la muestra se considera positiva.
¿Qué indica el ciclo umbral (Ct-cycle threshold) en una curva de amplificación?
La cantidad de ácido nucleico diana presente en la muestra.
El punto donde la fluorescencia pasa de niveles no significativos a detectables.
La línea base de la fluorescencia en las muestras negativas.
El pico de amplificación en la curva melting.
¿Qué sucede cuando la cantidad de ácido nucleico diana en una muestra aumenta?
El valor de Ct aumenta.
El valor de Ct disminuye.
La línea base se desplaza hacia arriba.
El umbral de fluorescencia se reduce.
¿Qué se observa en un único pico de amplificación en la curva melting?
La línea base de la fluorescencia.
La especificidad de la reacción y el tamaño esperado de los amplicones.
El ciclo umbral de la amplificación.
La cantidad de ácido nucleico presente en la muestra.
