UF1NF5_Electroforesi gel agarosa

UF1NF5. TÈCNIQUES

DE SEPARACIÓ

CFGS Laboratori clínic i biomèdic

M2. Tècniques generals de laboratori

Institut Castellarnau (Sabadell)

NA 3. ELECTROFORESI

​Pràctica 3: Electroforesi de DNA en gel d'agarosa

Què hem

après?

Multiple Choice

FONAMENT DE L'ELECTROFORESI
En què es basa aquesta tècnica per aconseguir la separació de diferents partícules?

• En la força d'un camp elèctric aplicat a partícules carregades elèctricament

• En una força centrífuga que permet separar partícules suspeses en un líquid

• Es basa en la diferència de densitats dels components de la mescla

Multiple Select

ELECTROFORESI DE DNA EN GEL D'AGAROSA

Per què els fragments de DNA s'han separat en aplicar el camp elèctric?

• Perquè tenen càrregues elèctriques diferents

• Perquè tenen mides (bp) diferents

• Perquè el gel d'agarosa és un suport restrictiu

A la pràctica hem utilitzat uns quants reactius...

Recordes per a què servien?

​TBE
0.5X

• ​Agarosa

• ​Tampó TBE 0.5x

• ​Tampó de càrrega 6X

• ​SYBR-safe

• ​Ladder

Multiple Select

COMENCEM!

En primer lloc, hem preparat el gel d'agarosa...

Quins reactius hem barrejat?

• Agarosa

• Tampó TBE 0.5X

• Tampó de càrrega 6X

• SYBR-safe

• Ladder

Multiple Select

Què aporta el tampó de càrrega quan el barregem amb la mostra?

• És un intercalant del DNA i ens permet la visualització de les bandes un com realitzada l'electroforesi.

• Aporta pes a la mostra gràcies a la seva composició amb sacarosa, així la mostra no surt del pouet en dipositar-la

• Modifica la càrrega neta del DNA convertint tots els fragments en càrregues negatives

• Conté colorant Blau de bromofenol que ens permet visualitzar l'avançament de l'electroforesi

Fill in the Blanks

A quin carril hem aplicat el Ladder (patró de fragments de DNA de mida coneguda)?

És l'hora de la interpretació de resultats...

...preparats?

Obre el full de càlcul compartit (carpeta Drive d'accés a l'alumnat M2) i segueix les instruccións del video:

https://www.loom.com/share/e7613365f64d4bb6bda56d4a17c5a80d

Resolem un cas clínic...


Llegeix amb atenció el document adjunt i resol totes les qüestions:


https://docs.google.com/document/d/1d_ajRXpmyyMieR5g9ArJvVMpdDFWXCSWHc9bqBn0bJg/edit?usp=sharing


(també pots trobar la fitxa i el solucionari a la carpeta compartida Drive d'accés a l'alumnat M2)