Câu hỏi về Sắc ký và Điện di

Để loại bỏ các protein không mong muốn theo kích thước, người ta thường dùng:

• Sắc ký ái lực

• Sắc ký trao đổi ion

• Sắc ký lọc gel

• Kết tủa bằng ammonium sulfate

Phương pháp sắc ký ái lực (affinity chromatography) có nguyên lý dựa trên:

• Khối lượng phân tử

• Tương tác điện tích

• Tương tác đặc hiệu giữa protein và ligand

• Độ hòa tan trong dung môi

SDS trong SDS-PAGE có vai trò:

• Cung cấp điện tích âm cho protein và làm biến tính

• Tăng khả năng khuếch tán protein

• Làm tăng khối lượng protein

• Làm tăng liên kết disulfide

Trong SDS-PAGE, yếu tố quyết định tốc độ di chuyển của protein là:

• Hình dạng không gian

• Khối lượng phân tử

• Điện tích tổng

• Tính tan trong nước

Vai trò của gel cô (stacking) trong SDS-PAGE là:

• Làm tăng độ phân giải

• Tập trung mẫu tại một vùng ban đầu

• Làm biến tính protein

• Nhuộm protein

Dung dịch đệm chạy gel thường được chọn để:

• Ổn định pH và dẫn điện

• Cung cấp enzyme cắt

• Làm kết tủa protein

• Làm tăng nhiệt độ chạy gel

Bước đầu tiên trong 2D-PAGE là:

• Điện di theo kích thước

• Điện di theo điện tích - pI

• Western blot

• Phân tích bằng khối phổ

Kỹ thuật điện di 2D cho phép phân tách protein tốt hơn vì:

• Dùng SDS với nồng độ cao hơn

• Kết hợp hai đặc tính: pI và khối lượng

• Protein không bị biến tính

• Tăng độ dẫn điện của gel

Western blot sử dụng để:

• Nhận diện DNA đặc hiệu

• Tinh sạch protein theo kích thước

• Nhận diện protein đặc hiệu bằng kháng thể

• Đo nồng độ ion Ca2+

Trong western blot, kháng thể sơ cấp (primary antibody) có vai trò:

• Cố định protein lên màng

• Nhận diện protein mục tiêu

• Làm thay đổi pH

• Tăng độ nhạy của màng